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目的:运用蛋白组学相关技术筛选HIV/AIDS肺脾气虚证差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析,研究差异表达蛋白的功能,探讨差异表达蛋白与HIV/AIDS肺脾气虚证临床证候的联系,探索HIV/AIDS肺脾气虚证的生物学基础。方法:1按HIV/AIDS肺脾气虚证诊断量表,共纳入HIV/AIDS肺脾气虚证患者25例,同地区健康人16例作为对照组,采集受试者血清样本;2采用Human-14多重离心亲和去除系统去除血清中高丰度蛋白,并采用SDS-PAGE凝胶电泳对高丰度蛋白去除效果进行初步评价;3运用i TRAQ-MS技术对血清中的蛋白进行分析,质谱数据利用Mascot软件对uniprot.human.fasta数据库进行查库鉴定分析,并采用Proteome Discoverer软件对肽段报告离子峰强度值进行定量分析,筛选出HIV/AIDS肺脾气虚证差异表达蛋白;4生物信息学分析利用本地化序列比对软件NCBI BLAST+将鉴定到的蛋白质与Swiss Prot human数据库中的蛋白质序列进行比对,利用Blast2GO中的Mapping功能对目标蛋白比对序列所关联的基因本体(GO)功能条目进行提取,分析目标蛋白所参与的生物过程(Biological Process,BP)、分子功能(Molecular Function,MF)、细胞组分(Cellular Component,CC)。利用KAAS(KEGG Automatic Annotation Server)将目标蛋白序列与KEGG GENES数据库中的人类蛋白序列进行比对,通过同源/相似蛋白的KO(KEGG Orthology)号注释到相关KEGG通路上,分析确定目标蛋白参与的最主要的代谢和信号转导途径。结果:1 HIV/AIDS肺脾气虚证组和健康对照组在年龄、性别组成、CD8水平上无显著性差异(p>0.05),HIV/AIDS肺脾气虚证患者CD4水平、CD4/CD8水平较健康对照组明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);2 SDS-PAGE凝胶电泳结果示去除高丰度蛋白后血清蛋白样品电泳后条带明显增多,高丰度蛋白遮蔽作用明显降低,不同分子量的蛋白分离清晰;3经过去除高丰度蛋白、酶解消化、i TRAQ试剂标记、LC-MS质谱分析、Mascot查库共鉴定出唯一肽段(Unique Peptide)2612个,蛋白质组(Protein Group)279个,其中各通道标记标签皆有定量信息的蛋白质组195个;4以质谱结果中组间比值改变结合t-test分析P value值进行差异表达蛋白筛选:1.以倍数改变>1.2或<0.83为标准,共鉴定差异表达蛋白4个,其中Apolipoprotein A-II、c DNA FLJ93143 highly similar to Homo sapiens complement component 7表达上调,Leucine-rich repeat protein 1、Urea transporter 2表达下调;2.以倍数改变>1.15或<0.87为标准,共鉴定差异表达蛋白8个,其中Serine/cysteine proteinase inhibitor clade G member 1 splice variant 2、Apolipoprotein A-II、c DNA FLJ93143 highly similar to Homo sapiens complement component 7表达上调,Zinc-alpha-2-glycoprotein、Urea transporter 2、THAP domain-containing protein 4、Apolipoprotein B、Leucine-rich repeat protein 1表达下调;5仅以p value值<0.05为标准筛选出24个蛋白进行生物信息学分析显示,差异表达蛋白生物过程涉及细胞杀伤、生物粘附、多细胞组织过程、单一器官生物过程、细胞迁移、复制等9个方面;分子功能涉及受体激活、转运活化、结合3个方面;细胞组分涉及细胞成分、膜成分、细胞外区域、膜内腔、大分子混合物5个方面;6 KEGG通路分析显示差异表达蛋白主要涉及代谢或信号通路包括:系统性红斑狼疮、Fc-γ-R介导的吞噬作用、金黄色酿脓葡萄球菌感染、脂肪消化吸收、维生素消化吸收、受体激活、病毒引起的致癌作用、朊病毒疾病、补体级联聚沉、阿米巴病10个。结论:1多重亲和离心去除系统Human-14能有效去除血清中14种高丰度蛋白,有效降低血清中高丰度蛋白对低丰度蛋白检测的遮蔽作用,有利于对疾病相关标志物的发现,有利于中医证候生物学基础的研究。2运用i TRAQ-MS技术筛选出了HIV/AIDS肺脾气虚证一系列差异表达蛋白,提示i TRAQ技术用于HIV/AIDS相关中医证候生物标志物的研究有良好的前景。差异表达蛋白在疾病发生发展过程中的作用尚未完全清楚,还需进一步评价其可靠性。3中医证候作为疾病发生演变过程中特定阶段症状和体征的概括是有生物学基础的。对筛选出的差异表达蛋白进行生物信息学分析显示,差异表达蛋白分子功能及信号、代谢通路多与免疫和营养物质消化吸收相关。尿素转运蛋白、载脂蛋白A-II、锌-α-2-糖蛋白异常表达与HIV/AIDS肺脾气虚证临床症状:咳痰清稀、乏力气喘、胸闷、心慌心悸、泄泻等密切相关,可能是HIV/AIDS肺脾气虚证潜在的生物学基础。4锌-α-2-糖蛋白在蛋白和基因表达水平的下调涉及多个脏器的恶性肿瘤,并和体内脂类代谢障碍相关,目前文献报道只将锌-α-2-糖蛋白视作某一类肿瘤的生物学标志物是片面的。同时锌-α-2-糖蛋白也可以作为后期伴发肿瘤的因子,无论是在中医理论上还是在现代病理研究上都能找到依据,锌-α-2-糖蛋白可能是HIV/AIDS肺脾气虚证后期病理演变的生物学基础。