目的:血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)是非终末分化细胞,具有表型重塑的特性。SM22α(smooth muscle 22 alpha, SM22α)是VSMC分化早期的标志基因之一,其表达具有平滑肌组织特异性和细胞表型特异性。本研究利用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲低内源性SM22α表达,观察对转化生长因子β(transforming growth factor, TGFβ)诱导的VSMC细胞骨架组构、氧化应激以及分化相关转录因子Krüppel样因子4(krüppel-like factor 4, KLF4)活化的影响。方法:用贴块法分离、培养大鼠VSMC,取3～5代细胞进行实验;用免疫沉淀检测KLF4的磷酸化水平;Western blot分析检测TGFβ对SM22α和SMα-actin表达的影响;用免疫荧光染色显示细胞内SM22α表达和定位;用DHE染色确定SM22α在氧化应激中的作用。结果:1 TGFβ诱导血管平滑肌细胞表达SM22α用TGFβ(2 ng/ml)刺激VSMC不同时间,SM22α、SMα-actin的表达水平呈时间依赖性升高。表明TGFβ能诱导血管平滑肌细胞SM22α表达。2 SM22α抑制TGFβ诱导的分化转录调节因子KLF4磷酸化Western blot结果显示,TGFβ处理的细胞,其KLF4的磷酸化水平明显升高。转染SM22α特异的siRNA敲低内源性SM22α表达后, TGFβ诱导的KLF4磷酸化较对照组更加明显。提示SM22α可抑制TGFβ诱导的KLF4磷酸化。3 SM22α介导TGFβ诱导的actin应力纤维的形成免疫荧光染色结果显示,TGFβ处理的VSMC应力纤维致密、成束,SM22α荧光强度明显增强,沿应力纤维分布;而敲低内源性SM22α,再给予TGFβ刺激,则细胞应力纤维稀疏,SM22α荧光强度减弱,弥散分布于细胞浆中。提示SM22α参与了TGFβ诱导的应力纤维形成。采用DHE荧光染色法观察VSMC O2?-的生成。结果显示,TGFβ刺激后,显示O2?-生成的红色荧光强度增加;敲低内源性SM22α,再给予TGFβ刺激,可见细胞内红色荧光强度更明显。说明TGFβ可诱导VSMC产生氧化应激,而SM22α对该过程可能具有抑制作用。结论: 1 TGFβ诱导血管平滑肌细胞表达SM22α; 2 SM22α抑制TGFβ诱导的分化转录调节因子KLF4磷酸化和氧化应激; 3 SM22α介导TGFβ诱导的actin应力纤维形成。4 SM22α抑制TGFβ诱导的氧化应激采用DHE荧光染色法观察VSMC O2?-的生成。结果显示,TGFβ刺激后,显示O2?-生成的红色荧光强度增加;敲低内源性SM22α,再给予TGFβ刺激,可见细胞内红色荧光强度更明显。说明TGFβ可诱导VSMC产生氧化应激,而SM22α对该过程可能具有抑制作用。结论:1 TGFβ诱导血管平滑肌细胞表达SM22α;2 SM22α抑制TGFβ诱导的分化转录调节因子KLF4磷酸化和氧化应激;3 SM22α介导TGFβ诱导的actin应力纤维形成。