基于蒽酰亚胺的荧光探针的设计及生物成像研究

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过氧化氢(H2O2)是人体众多活性氧中非常重要的一种,在许多生理过程中起着重要的作用,人体内H2O2含量的异常与许多重大疾病之间存在一定的关系。近些年来,药物诱导的器官损伤已经成为影响公共健康的一个重要问题。研究表明在药物诱导器官损伤的病理过程中H2O2的含量会显著上升,监控细胞与活体内H2O2含量的变化,有利于评估药物引发的病理过程。因此能够对细胞与活体内的H2O2进行有效地检测、监控和实时成像有着非常重要的意义。荧光探针由于其选择性和灵敏度高、抗干扰性强、原位检测、高时间-空间分辨率等优势,已经成为疾病诊断与科学研究中不可或缺的重要工具。蒽酰亚胺作为一种新型的荧光团,其不仅保持了萘酰亚胺衍生物的优势如高量子产率、荧光稳定、斯托克斯位移(Stokes shift)大;而且还拥有较长的吸收波长与发射波长,有利于活体内的应用。此外,蒽酰亚胺衍生物的光学性能会根据蒽环6号位处取代基“推-拉”电子能力的不同发生相应的改变,这为基于蒽酰亚胺的荧光探针的设计提供了更好更便利的可能性。脂质体纳米粒子具有好的生物相容性,将荧光探针载入脂质体纳米粒子中制备脂质体荧光纳米探针(Liposome fluorescent nanoprobe)对于活体内的荧光检测与成像有着非常广阔的应用前景。在本文中,基于分子内电荷转移(ICT)原理,我们以蒽酰亚胺为荧光团,在蒽环6号位处引入对H2O2具有特异反应性的对硝基苯偶酰基团,构建H2O2比率型荧光探针。该探针对H2O2表现出高选择性与高灵敏性,能够对低浓度范围(0-5μM)内的H2O2实现定量检测,检测下限为0.49μM;具有长应用波长:吸收为560 nm,荧光发射为595nm。为了进一步增强探针在生物系统的应用、活体成像的能力,充分利用两亲性聚合物的优势,利用含聚乙二醇的磷脂,将探针载入PEG修饰的脂质体纳米粒子中,制备长循环脂质体荧光纳米探针NPs-A。NPs-A类似球状结构,粒径约为90 nm,大小均一,分散良好;生物相容性好,可用于活细胞内H2O2的检测与成像;NPs-A具有较长循环能力,可以对斑马鱼内源性H2O2进行比率荧光成像,追踪APAP药物诱导的斑马鱼器官损伤;这为研究H2O2在病理过程中所起到的作用提供了一种便捷的方法。
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