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传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的以侵害雏鸡淋巴组织，特别是中枢免疫器官—法氏囊为主要特征的传染病。该病不仅引起患病动物死亡，而且还导致机体免疫抑制，是引起我国及世界养禽业经济损失严重的主要传染病之一。近几年，由于变异株和超强毒株（vvIBDV）的出现，使本病的发生和流行出现新的特点，对养鸡业的危害更加严重，并给临床诊断和治疗带来了一定困难。因此，研制快速、准确的诊断方法对IBD的防治至关重要。本研究旨在制备抗IBDV的单克隆抗体，建立IBDV双抗体夹心ELISA和胶体金免疫层析试纸条检测方法，为IBD的快速检测和诊断提供帮助。1.分泌抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立用纯化的IBDV抗原免疫BALB/c小鼠，制备脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞系融合，获得3株能稳定分泌抗IBDV VP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为1D11、2G8和2E5，抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ，诱生腹水的抗体效价分别为107、106和107。间接免疫荧光试验（IFA）表明，3株单克隆抗体均与感染IBDV的DF-1细胞发生特异性反应；免疫印迹（western blot）分析，单抗1D11和2E5与纯化IBDV分别在40KDa和32KDa处产生特异性蛋白条带，而单抗2G8未产生特异性蛋白条带；在病毒中和试验中，2G8的腹水中和效价为104，而1D11和2E5无中和活性。相加ELISA结果显示，1D11和2G8识别的抗原表位相似或相近，2G8和2E5识别的抗原表位差异较大。2.传染性法氏囊病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立单抗腹水经HiTrapTM Protein G亲和层析柱纯化后，以1D11为捕获抗体，辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体2E5为检测抗体，建立了IBDV双抗体夹心ELISA检测方法。试验结果表明：所建立的双抗体夹心ELISA检测方法与传染性支气管炎病毒（IBV）、减蛋综合症病毒（EDS-76V）、禽流感病H9N2亚型（AIV-H9N2）、新城疫病毒（NDV）均无交叉反应，特异性良好；该方法对IBDV的最低检出量为102TCID50；用夹心ELISA、AGP和RT-PCR三种方法同步检测97份临床样品，检测结果表明，双抗体夹心ELISA与RT-PCR的符合率达95.3%，而AGP试验与RT-PCR的符合率为82.5%。本研究建立的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和临床实用性，为开发商品化IBDV抗原检测试剂盒提供前期基础，具有很好的临床应用前景。3.传染性法氏囊病病毒胶体金免疫层析试纸条的研制本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记纯化的抗IBDV单克隆抗体2E5作为捕捉抗体，将纯化的抗IBDV单克隆抗体2G8和羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜（NC）上，分别作为检测线和质控线，优化反应条件，组装成胶体金免疫层析试纸条。结果表明：该试纸条与IBV、EDS-76V、AIV-H9N2、NDV均无交叉反应；其对IBDV的最低检出量为103TCID50；用不同批次的试纸条重复检测，结果无差异。所制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性，在1～5min之内即可得出检测结果，便于IBDV的快速诊断和检测。