论文部分内容阅读
目的:研究可卡因—安非他明调节转录肽（cocaine-amphetamine-regulated transcript,CART）抗体在吗啡依赖和复吸中的作用。方法:用分子生物学的技术克隆将CART55-102序列克隆到pGEX-4T3原核表达载体多克隆位点,构建GST—CART55-102融合表达载体。在原核细胞中表达并纯化融合蛋白GST—CART55-102,免疫学方法制备CART55-102多克隆抗体,用亲和层析技术纯化CART55-102抗体,蛋白印记技术鉴定亲和层析纯化抗体的特异性,用行为学方法分别观察纯化后兔源性CART55-102抗体对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的影响。结果:GST—CART55-102在大肠杆菌中能以上清的形式大量表达,并能用GST亲和层析方法获得纯度大于90%的GST—CART55-102。商业化CART单抗可识别该融合蛋白,表明该融合蛋白具有CART单抗所识别的抗原表位。Western blot显示用该融合蛋白制备并用亲和层析技术纯化的兔源性CART55-102抗体的能特异性识别CART55-102,行为学结果显示,每日吗啡训练前两小时静脉注射CART55-102抗体（2mg/kg,4mg/kg）,能抑制在吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的形成;吗啡训练完成后（连续训练7天）,单次静脉注射CART55-102抗体（2mg/kg,4mg/kg,8mg/kg）能明显改变吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的行为（P<0.05,P<0.01及P<0.01）;吗啡训练完成后,连续三天静脉注射CART55-102抗体（2mg/kg,4mg/kg,8mg/kg）,其中4mg/kg和8mg/kg剂量能够完全逆转吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱效应（P均为P<0.01）,然而2mg/kg剂量虽能明显改变小鼠在吗啡诱导下的条件性位置偏爱效应（P<0.05）,但作用维持时间较短;在条件性位置偏爱的点燃重建实验中静脉注射过CART55-102抗体的小鼠都没有被重建。结论:预防性给CART55-102抗体能明显抑制由吗啡训练引起的小鼠条件性位置偏爱的形成;治疗性给抗CART55-102抗体能明显改变小鼠吗啡诱导的条件性位置偏爱,且在两小时后产生效应;连续治疗性给予CART55-102抗体能彻底改变吗啡诱导形成的小鼠条件性位置偏爱;连续治疗组能够明显抑制条件性位置偏爱的点燃重建作用。以上结果进一步证明了CART可能是一种内源性精神活性物质,而CART55-102抗体可能具有对抗吗啡成瘾的精神依赖的潜力。