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多糖是一类由广泛存在于自然界的生物体产生的独特的生物大分子。它们具有各种各样特殊的且在大多数情况下相当复杂的化学结构,不同的生理功能和广泛的(潜在的)应用价值。本论文对硅酸盐细菌的胞外多糖进行了分离纯化,并初步研究了其糖基组成。使用紫外线对硅酸盐细菌进行诱变处理,利用平板初筛,摇瓶复筛,最终获得胞外多糖高产菌株UV-23。对其摇瓶发酵培养基和摇瓶发酵条件进行了优化,提高了硅酸盐细菌胞外多糖的产量。
硅酸盐细菌经过摇瓶培养后,采用碱提醇沉法得到粗多糖,粗多糖经紫外光谱分析不含核酸和蛋白质,再经DEAE-纤维素离子交换柱层析纯化得到纯多糖,采用SephadexG-100凝胶柱层析和醋酸纤维薄膜电泳对纯多糖进行纯度检验,结果表明纯多糖为单一组分,然后采用化学法对纯多糖的糖基组成进行分析,结果表明硅酸盐细菌胞外多糖含有糖醛酸,不含有氨基己糖和硫酸取代基。
利用孢子热处理法对硅酸盐细菌进行纯化,选择多糖发酵性能较好的7号菌株作为诱变出发菌株,摇瓶多糖产量为0.51g/L。然后对出发菌株进行紫外线诱变处理,经过平板初筛和摇瓶复筛,最终获得多糖高产菌株UV-23,产量达到0.59g/L,是出发菌株的1.16倍。
通过单因素试验和均匀设计优化,确定UV-23菌株的最佳发酵培养基配方为:蔗糖1%、硫酸铵0.3%、KCl0.06%、Na2HPO40.1%、MgSO4·7H2O0.09%、酵母膏0.08%、CaCO30.33%,按优化后的培养基进行摇瓶发酵试验,多糖产量为2.25g/L。
在单因素试验的基础上,采用响应面分析方法对发酵培养的初始pH、装液量和温度进行优化,优选得到较佳的摇瓶发酵工艺条件:初始pH7.8、装液量80mL/250mL,发酵培养温度39.5℃,摇瓶发酵产量为3.73g/L。