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丝状病毒科包括埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)，是能引起人致命性出血热的烈性病毒，死亡率可达到50％～90％。不仅对疫源地人员有着严重威胁，随着全球化贸易与人员往来的增多，丝状病毒出血热在一些没有爆发的国家和地区同样有着巨大的风险。因此，对于还未有丝状病毒出血热报道的国家而言，建立EBOV与MARV的实验室检测手段具有重要的意义。本论文通过原核表达系统制备EBOV和MARV的核蛋白NP作为检测用的抗原，建立一种间接ELISA方法，用于检测EBOV与MARV。首先，分别将EBOV和MARV的NP编码基因插入到原核表达载体pET28a上，通过诱导，表达了可溶性的核蛋白NP。其中，通过一系列的优化步骤，将可溶表达量极小的MARV-NP的表达水平提高了4倍左右。接着，用镍柱对经破碎的菌液中带有his-tag的目的蛋白进行纯化回收。最终，经过计算，约30 ml MARV-NP-pET28a菌液可以制备约20μg的纯MARV-NP抗原，约10 ml EBOV-NP-pET28a菌液可以制备约30μg的纯EBOV-NP抗原。分别将表达为包涵体的EBOV-NP和MARV-NP免疫实验用兔，制备多克隆抗体。Western-blot验证制备的可溶性抗原及抗体的有效性。在完成材料的制备后，初步确定了在实验室条件下的ELISA用试剂及参数，包括封闭液、洗涤液、二抗稀释度和抗原孵育量等参数，以获得较低的背景值，并分别将MARV-NP和EBOV-NP抗原与相应抗体的反应性通过间接ELISA进行呈现。以兔IgG作为阴性对照，其结果有很高的灵敏度，而且两个抗原间的交叉反应小，具有较好的特异性。由于暂时无法获得阳性样本，我们检测了100份人群血清样本，并根据检测得到的数据，得到了阳性样本的参考值，最后确定了《丝状病毒ELISA检测操作说明》，为之后的研究与应用工作提供了参考材料。