不同环境样品中邻苯二甲酸酯降解细菌的分离,遗传多样性及降解特性研究

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邻苯二甲酸酯是一类在工业中广泛应用的的难降解有机化合物。由于其大量释放到环境中以及对人体和其它生物体的危害,近年来邻苯二甲酸酯类化合物的污染问题已引起各国的广泛关注。现有的研究结果表明,邻苯二甲酸酯在环境中水解、光解的速度非常慢,微生物的降解作用是从环境中消除这类广泛分布污染物的重要途径。本文目的在于研究不同的环境样品中分离到的细菌对邻苯二甲酸酯的生物降解作用。主要包括邻苯二甲酸酯降解细菌的降解活性及遗传多样性研究以及特定的分离物对邻苯二甲酸二辛酯的降解机制和邻苯二甲酸二乙酯的降解动力学研究。首先通过富集培养以邻苯二甲酸酯混合物为唯一碳源和能源从全国13个不同的采样点中分离到了32株降解邻苯二甲酸酯的细菌。16S rRNA基因序列分析这些细菌分布在6个属(Arthrobacter, Gordonia, Rhodococcus, Acinetobacter, Pseudomonas,和Delftia).为了研究这些细菌的遗传多样性,采用基于不同重复序列(ERIC, REP以及BOXAIR)的分子标记技术rep-PCR从基因组水平进行了研究。结果表明大多数菌株具有不同的指纹图谱。另外,从中选择了代表性的菌株以不同的邻苯二甲酸酯及重要的中间代谢产物邻苯二甲酸进行了底物利用实验。结果发现不同菌株对底物的利用不同,预示着这些菌株可能具有不同的代谢途径。同时,高效液相色谱(HPLC)检测表明这些菌株对邻苯二甲酸二甲酯的降解在48.32%-100%之间。这些结果表明自然环境中的苯二甲酸酯降解细菌具有高度的多样性,并且在修复邻苯二甲酸酯污染的环境中具有较大的应用潜力。基于前面的研究,从中选择Gordonia sp. JDC-2和Arthrobacter sp. JDC-32来研究这两株菌的共培养降解对邻苯二甲酸二辛酯的降解机制。结果发现Gordonia sp. JDC-2能够快速降解邻苯二甲酸二辛酯至邻苯二甲酸,然后邻苯二甲酸作为终代谢产物在培养基中积累。而Arthrobacter sp. JDC-32能够快速降解邻苯二甲酸但不能利用邻苯二甲酸二辛酯。因此两株菌的共培养能够克服两株菌单独作用时的代谢缺陷从而完全降解邻苯二甲酸二辛酯。同时根据JDC-2降解邻苯二甲酸二辛酯过程中检测到的代谢产物,推断出了JDC-2降解邻苯二甲酸二辛酯的降解途径。该部分研究表明从污泥中分离到的不同菌株可以通过代谢协同作用完全降解邻苯二甲酸二辛酯。最后,进一步研究了Acinetobacter sp. JDC-16对邻苯二甲酸二乙酯的降解。以邻苯二甲酸二乙酯(DEP)为目标测试物,确定了该菌最佳降解条件为:pH 8.0、温度35℃。同时在不同DEP初始浓度下研究了该菌的降解动力学,发现降解曲线能够与Gompertz模型很好的拟合(R2>0.99)。另外,底物诱导实验表明DEP诱导能显著缩短迟缓期从而提高降解速率。本研究表明该菌株在邻苯二甲酸二乙酯污染环境的生物修复中具有潜在的应用价值。
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