目的：1．研究STIM1、Orai1蛋白在动脉平滑肌细胞中的定位。2．探讨STIM1、Orai1蛋白在动脉平滑肌细胞中是否直接相互作用。方法：1．常规培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5。2．RT-PCR方法获得Orai1、STIM1基因，构建荧光融合表达载体pEGFP-C₁-Orai1、pEGFP-C₁-STIM1和非融合表达载体pIRES₂-EGFP-Orai1、 pIRES₂-EGFP-STIM1。3．Western-blot方法验证A7r5细胞中Orai1、STIM1蛋白的表达。4． pIRES₂-EGFP-Orai1、 pIRES₂-EGFP-STIM1重组载体分别转染A7r5细胞，Western-blot技术检测转染后Orai1、STIM1蛋白，比较转染前后蛋白表达量的差异。5．重组载体pEGFP-C₁-Orai1、pEGFP-C₁-STIM1分别转染A7r5细胞、激光共聚焦技术确定转染后高表达的STIM1、Orai1在细胞内的位置。6．免疫荧光方法对A7r5细胞的Orai1、STIM1蛋白进行定位。7．正常培养A7r5细胞，CPA处理10min，提取蛋白，免疫共沉淀方法鉴定STIM1、Orai1蛋白间相互作用。8．pIRES₂-EGFP-Orai1、pIRES₂-EGFP-STIM1重组载体分别转染A7r5细胞，CPA处理10min，提取蛋白，免疫共沉淀方法鉴定STIM1、Orai1蛋白间相互作用。结果：1．成功构建pEGFP-C₁-Orai1、pEGFP-C₁-STIM1、pIRES₂-EGFP-Orai1、pIRES₂-EGFP-STIM1四种重组质粒。2．应用Western-blot技术，检测到A7r5细胞内STIM1、Orai1蛋白的表达。3．重组质粒pIRES₂-EGFP-Orai1、pIRES₂-EGFP-STIM1转染细胞，提取蛋白，分别检测到STIM1、Orai1蛋白的高表达。4．分别用免疫荧光和pEGFP-C₁-STIM1质粒转染方法确定，在A7r5细胞内，STIM1蛋白定位于内质网膜上。5．正常培养的A7r5细胞，以STIM1抗体和Orai1抗体分别进行免疫共沉淀，检测到二者间存在相互作用。6．重组质粒pIRES₂-EGFP-Orai1、pIRES₂-EGFP-STIM1转染的细胞，以STIM1抗体和Orai1抗体分别进行免疫共沉淀，检测到二者间存在相互作用。结论：1．初步实验表明，在A7r5细胞内，STIM1蛋白位于细胞质内。2．在A7r5细胞内，STIM1、Orai1蛋白间存在直接相互作用。