【摘 要】
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酶制剂在提高青贮品质上越来越受到人们关注,但主要针对提高青贮饲料营养成分、改善发酵品质等方面。关于酶制剂是如何影响发酵过程中复杂的微生物过程及其相关机制尚不清楚。本试验通过添加不同浓度纤维素酶（0.04g/kg、0.05 g/kg、0.06 g/kg）和半纤维素酶（0.3 g/kg、0.4 g/kg、0.5 g/kg）,按照6:4比例将青贮玉米和紫花苜蓿混合青贮,研究不同时间段（0 d、7 d、1
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酶制剂在提高青贮品质上越来越受到人们关注,但主要针对提高青贮饲料营养成分、改善发酵品质等方面。关于酶制剂是如何影响发酵过程中复杂的微生物过程及其相关机制尚不清楚。本试验通过添加不同浓度纤维素酶（0.04g/kg、0.05 g/kg、0.06 g/kg）和半纤维素酶（0.3 g/kg、0.4 g/kg、0.5 g/kg）,按照6:4比例将青贮玉米和紫花苜蓿混合青贮,研究不同时间段（0 d、7 d、14d、30 d、45 d）青贮饲料营养品质的动态变化,同时结合微生物多样性16S r RNA高通量测序,阐明了酶制剂如何通过对青贮发酵过程中微生物的调控影响青贮品质。主要研究结果如下:1.各处理青贮料感官评定结果:青贮45天后,7个处理组的青贮饲料开罐后p H值在3.68～3.72之间,均未出现发霉现象,茎叶结构均保持完整,质地松散,色泽为黄绿色;感观评分分为两个等级,对照组、0.04 g/kg和0.05 g/kg纤维素酶处理组处理为良好,其余4组处理为优秀。2.各处理青贮过程中营养物质含量变化规律:青贮过程中,各处理WSC含量、NDF、ADF呈显著下降趋势;DM含量前期下降,30d后上升;CP含量前30d下降后趋于平稳。青贮45d后添加0.06 g/kg纤维素酶、0.5 g/kg半纤维素酶处理组的CP损耗率最小（P?0.05）;添加0.5 g/kg半纤维素酶处理组的DM含量最高（P?0.05）,添加0.06 g/kg纤维素酶NDF、ADF含量最低（P?0.05）。对感官和营养品质进行隶属函数分析表明,添加0.5 g/kg半纤维素酶和0.06 g/kg纤维素酶处理组表现较好。3.0.5 g/kg半纤维素酶和0.06 g/kg纤维素酶处理组与CK发酵品质分析:随着青贮时间的延长,各组p H值呈下降趋势,青贮45d后各处理p H值均小于3.8。青贮45d后三个试验组氨态氮含量没有显著差异（P?0.05）。LA、AA含量均随青贮时间延长呈逐渐上升的趋势,在青贮45d时添加0.06 g/kg纤维素酶处理组LA含量高于其他组（P?0.05）。添加0.06 g/kg纤维素酶处理组在整个过程中AA含量变化最小。PA、BA各组各时期均未检测出。4.0.5 g/kg半纤维素酶和0.06 g/kg纤维素酶处理组与CK微生物高通量测序:（1）采用16Sr RNA扩增技术进行高通量测序,3组处理共检测到细菌665个科、1526个属、1955个种,真菌354个科、853个属、1545个种;（2）各处理组细菌多样性ACE指数和Chao指数随着青贮发酵时间的延长呈上升趋势,Simpson指数呈先下降后上升趋势（P＜0.05）,除3d时CK组细菌Simpson指数显著低于其他两组（P＜0.05）;各处理组真菌多样性ACE指数和Chao指数随着青贮发酵时间的延长上下波动,Simpson指数和Shannon指数呈先下降后上升趋势（P＜0.05）。（3）随着青贮时间的延长,不同的添加剂导致菌群发生剧烈变化,添加0.06 g/kg纤维素酶组特有细菌OUT个数差异最大,45d后增加了945个;添加0.5 g/kg半纤维素酶组增加了827个。CK组差异最小增加了764个;添加0.06 g/kg纤维素酶组45d后真菌OTU,减少了123个,添加0.5 g/kg半纤维素酶组而45d后增加了127个。（4）菌群组成分析表明,各处理青贮前细菌的优势菌群为变形菌门（Proteobacteria）,青贮后变为厚壁菌门（Firmicutes）植物乳杆菌属（Lactiplantibacillus）;添加0.06 g/kg纤维素酶可缓解青贮过程中乳酸菌属丰度的下降;真菌的优势菌群为担子菌门（Basidiomycota）和哈萨克斯坦酵母属（Kurtzmaniella）。（5）相关性分析表明,在添加添加剂后使得乳杆菌属和一种未分类的蓝细菌对WSC含量产生了显著正相关影响,且消除了细菌群落对LA、AA含量的显著影响。添加了纤维素酶后,鞘氨醇单胞菌属对DM含量的影响变为不显著,添加了半纤维素酶后使得一种未分类的大肠杆菌对纤维素含量产生了显著影响。在添加添加剂后使得哈萨克斯坦酵母属对CP和NDF的影响减弱,对p H变为负相关;降低了链格孢属对NDF产生的影响。添加半纤维素酶后,会使多种真菌对营养物质的含量出现显著影响,有效抑制不良微生物的生长,从而显著提高青贮饲料品质。
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