氮乙酰基转移酶2（N-acetyltransferase-2） (NAT2)是近年来国际上倍受关注的代谢酶之一，它催化乙酰基团从乙酰辅酶A（乙酰CoA）转移到杂环胺类物质的乙酰化过程，在一些药物代谢以及致癌物质的灭活或活化过程中起着重要的作用。NAT2作为生物转化的第二相酶，其活性直接影响致癌物质在体内的代谢和毒性反应的强弱。NAT2具有多态性，由于不同酶切位点的突变，产生M1，M2，M3，M4等位基因，没有突变的野生型等位基因为WT。多态性的NAT2等位基因构成了多态性的基因型（WT/WT、WT/Mx、Mx1/Mx2），并根据其乙酰化作用强弱，不同基因型的乙酰化表型也呈多态性（快速型和慢速型）。任何两种突变型等位基因所组成的基因型（Mx1/Mx2）都表现为慢速乙酰化表型；基因型为WT/WT、WT/Mx（X=1，2，3，4）的个体表现为快速乙酰化表型。NAT2表型和等位基因分布在不同的民族和地域之间具有显著性差异。流行病学调查结果表明，NAT2乙酰化作用的多态性与人体不同部位发生癌变的危险性有关。大肠癌是河北省常见的肿瘤之一。大肠癌的发生除生活行为及环境因素外，机体内在的遗传因素日益受到重视。虽然NAT2的快速乙酰化作用一般被认为是大肠癌发病的危险因素。但是美国研究发现，NAT2等位基因（如WT、M1、M2、M3等）或NAT2基因型在肠癌患者和正常人之间的分布并无差异。河北汉族人群中，NAT2表型和等位基因在正常组织、大肠癌组织分布、表达及活性如何未见报道。因此，本研究通过对河北省汉族正常人群NAT2基因分布多态性进行分析，以及对河北汉族人群中大肠癌患者的NAT2基因型进行对照研究，探讨大肠癌NAT2的易感基因或保护因素；并检测不同NAT2基因型患者大肠组织中的mRNA表达、NAT2酶的活性。对N-乙酰基转移酶2的基因型、表型与大肠癌发生率的关系进行研究，揭示大肠癌发病的遗传因素，为大肠癌的预防、早期诊断和治疗提供实验依据。1 河北省汉族人群NAT2基因多态性分析NAT2基因位于人类第8对染色体短臂2区2带（8p22），基因全长<WP=5>为1093bp，在NAT2编码区，已检出11种寡核苷酸多态性（SNPs），并证实不同的SNPs影响NAT2酶的表达、稳定性及催化活性。其中由于编码区第481nt发生突变，KpnI酶的识别位点消失，产生的等位基因为M1；该基因中还有三个TaqI酶识别位点，其中590nt发生突变后产生的等位基因叫M2；857nt发生突变后，BamHI酶识别位点消失，产生M3；191nt发生突变后，MspI酶识别位点消失，产生M4；没有突变的NAT2基因为野生型WT。为获得河北汉族人群NAT2基因遗传资料，本研究从祖籍河北省并长期在河北省居住的汉族健康人群中随机抽取237份外周血样，实验对象均为无关个体（年龄20-80岁；男124例，女113例）。 按照PEL-FREEZ试剂盒操作说明从血细胞中提取DNA。采用PCR-RFLP方法分析NAT2基因多态性。PCR反应体系为40μl(含基因组DNA为50-200ng，引物20mM，dNTP　1.25mM，MgCl2 25mM，1(PCR缓冲液，Taq酶5u)。循环参数设定：95℃预变性5分钟；95℃1分钟，57℃1分钟，72℃1.5分钟循环35次，72℃延伸5分钟。扩增后，分别取15μl PCR产物以KpnI酶（M1 allele）、TaqI酶（M2 allele）、BamHI酶（M3 allele）、MspI/AluI酶（M4 allele）进行限制性酶切，酶切产物在2%（M1，M3）和4%（M2，M4）的琼脂糖凝胶中电泳1-3小时，用凝胶成像分析系统拍照分析。结果显示如下：1.1调查的237例河北健康汉族人群中发现4种NAT2等位基因，包括野生型基因WT、突变基因M1、M2、M3。野生型基因WT为231个，突变基因中，以M3为主（145个）；较少M1突变（24个），未发现M4基因。基因频率为：WT，0.4874；M1，0.0506；M2，0.1561；M3，0.3059。1.2发现10种NAT2基因型，分别为WT/WT、WT/M1、WT/M2、WT/M3、M1/M1、M1/M2、M1/M3、M2/M2、M2/M3、M3/M3。快速乙酰化基因型169例（71.31%），其中，纯合的个体62例（26.16%），杂合个体107例（45.15%），并以WT/M3为主（有69例），占样本的29.11%；慢速乙酰化基因型68例，占28.69%，其中纯合的慢速乙酰化个体24例（10.13%），杂合个体44例（18.57%），并以M2/M3基因型为主，共31例，占样本量的13.08%。各种基因型分布频率为WT/WT，0.2616；WT/M1，0.0380；WT/M2，0.1224；WT/M3，0.2911；M1/M1，0.0042；M1/M2，0.0169；<WP=6>M1/M3，0.0380；M2/M2，0.0211；M2/M3，0.1308；M3/M3，0.0759。该结果经Hardy-Weinberg吻合度检验符合Hardy-Weinberg定律， （χ2=7.2533，自由度υ=8，0.75>P>0.5），结果可信。上述结果提示：1.1在河北省汉族正常人群NAT2的等位基因中，以M3为主，主要以WT/M3形式存在，M1等位基因最少，未发现M4等位基因。1.2快速乙酰化基因型（71.31%）较慢速乙酰化基因型（28.69%）多。2 NAT2基因多态性与河北省汉族人大肠癌的相关性为了解河北汉族人群NAT2基因分布多态性与大肠癌易感性的关系，我们采用PCR-RFLP方法，对河北大肠癌患者的NAT2基因多态性进行了病例对照研究。实验对象为83例2001.11-2003.8石家庄市部分医院术后病理确诊的祖籍河北省并长期在河北省居住的汉族大肠癌患者（年龄25-77岁；男46例，女37例）。以及83例按照与大肠癌患者同