白念珠菌CaFOL1和CaFOL2基因功能的鉴定

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叶酸在体内可以转变为四氢叶酸,充当一碳单位转移酶系统中的辅酶,从而参与蛋氨酸的合成,嘌呤的合成以及胸腺嘧啶核苷酸的合成等生物途径。白念珠菌是一种重要的条件致病真菌。白念珠菌CaFOL1和CaFOL2基因的ORF全长分别是2367bp和831bp,分别编码含有788个氨基酸残基和276个氨基酸残基的蛋白质。为了研究CaFOL1和CaFOL2是否在体内四氢叶酸合成途径中发挥重要作用,我们使用URA-BLASTER技术构建了白念珠菌CaFOL1和CaFOL2基因的单等位基因缺失株和双等位基因缺失株。表型分析表明白念珠菌CaFOL2双等位基因缺失株(fol2△/fol2△)在不添加外源叶酸时不能存活。我们将白念珠菌CaFOL2基因克隆到白念珠菌表达载体pCR4上,把构建的pCR4-CaFOL2质粒转化到CaFOL2的双等位基因缺失株中。含有pCR4-CaFOL2质粒的缺失株能够在不添加外源叶酸的环境下生长。这些结果表明CaFOL2基因是白念珠菌四氢叶酸合成所需要的。然而,我们发现即使在外界补充叶酸的情况下,我们无法得到CaFOL1双等位基因缺失株,表明CaFOL1双等位基因缺失株在外界补充叶酸的情况下也可能不能生长。因此,我们推测CaFOL1是白念珠菌生长的必须基因。
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