长脉冲胃电刺激对糖尿病大鼠胃动力及Cajal间质细胞的影响及其机制研究

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目的以糖尿病大鼠为模型,研究糖尿病状态下胃排空和胃窦Cajal间质细胞的改变。方法取雄性Sprague Dawley大鼠12只,通过随机化分组分为两组:糖尿病组(DMgroup, n=6),通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ,60mg/kg)建立糖尿病模型;正常对照组(normal control group, n=6)。在造模前、成模后以及第2、4、6周记录每只大鼠的体重和血糖。在第6周末应用酚红餐法检测大鼠胃排空改变;使用透射电镜技术观察Cajal间质细胞超微结构改变;应用Western blot、免疫荧光法用来评估胃窦c-kit的表达情况。结果(1)造模前糖尿病组与正常对照组大鼠体重无显著差异。成模后第2、4、6周,糖尿病组大鼠体重与正常对照组相比均明显下降;(2)造模前两组大鼠之间血糖水平无显著差异。成模后以及第2、4、6周,糖尿病组血糖水平与正常组相比均明显升高;(3)糖尿病组大鼠相对于正常组胃排空明显延迟((55.89±3.32)% vs(76.55±2.36)%,(P=0.0005);(4) Western blot结果:糖尿病组胃窦组织c-kit蛋白表达水平与正常组相比显著降低:(5)免疫荧光检测糖尿病组胃窦c-kit+细胞数目与正常组相比明显减少;(6)糖尿病组大鼠Cajal间质细胞超微结构示细胞器数量减少,线粒体与内质网肿胀明显。结论糖尿病大鼠与正常大鼠相比胃排空明显延迟,Cajal间质细胞结构受损、数量减少。目的通过糖尿病胃轻瘫大鼠为模型,研究IGF-1通路及其他ICC相关调节因素对糖尿病胃轻瘫大鼠ICC改变的影响。方法通过免疫印迹法测定胃窦组织中c-kit、SCF、IGF-1R以及其它相关调节因素5-HT2B、nNOS蛋白的表达;采用免疫荧光技术检测c-kit+细胞和IGF-1R的表达;应用酶联免疫吸附试验测定血清中IGF-1水平;通过透射电子显微镜技术观测ICC超微结构的改变。结果 (1)免疫印迹法结果显示,糖尿病组胃窦组织c-kit/SCF、IGF-1R蛋白以及5-HT2B、nNOS蛋白表达水平与正常对照组相比均明显下降;(2)免疫荧光结果显示糖尿病组大鼠胃窦c-kit+细胞数目减少,IGF-1R受体表达减少;(3)酶联免疫吸附试验显示糖尿病组大鼠血清中IGF-1水平较正常对照组显著降低。结论糖尿病胃轻瘫大鼠SCF/c-kit以及IGF-1信号通路表达下调,5-HT2B及nNOS表达降低,并可能参与ICC缺失与损伤。目的通过糖尿病胃轻瘫大鼠为模型,研究IGF-1在胃电刺激GES修复糖尿病大鼠胃窦ICC中的作用。方法通过透射电镜检测ICC超微结构的改变:应用免疫印迹法测定胃窦组织中c-kit、 SCF、IGF-1受体蛋白的表达;应用免疫荧光法检测ICC细胞和IGF-1受体的表达;应用酶联免疫吸附试验测定血清中IGF-1水平变化。结果(1)成模前各组大鼠的血糖值无明显差异;成模后和第2周、4周和6周,真性及假性刺激组均与糖尿病组无明显差异:(2)成模前各组大鼠间体重无显著差异;成模后和第2周、4周,真性刺激组体重与糖尿病组相比无明显增加;但在成模后第6周,真性刺激各组大鼠体重与糖尿病组相比有显著差异;(3)糖尿病组胃排空较正常组明显延迟,予以3种参数胃电刺激后胃排空均有显著改善,其中GES2刺激效果最为显著;(4)免疫印迹法结果显示予以真性胃电刺激后,c-kit、SCF、IGF-1R蛋白表达水平较糖尿病组均有明显增加:(5)免疫荧光结果显示予以真性胃电刺激后c-kit+细胞数目增多,IGF-1R受体增多:(6)酶联免疫吸附试验显示真性胃电刺激后各组大鼠血清中IGF-1水平较糖尿病组显著升高;(7)真性胃电刺激组ICC细胞超微结构与糖尿病组相比,细胞膜结构更为完整,核内异染色质减少,线粒体、内质网肿胀程度显著降低,平滑肌细胞排列整齐,大的溶解空泡较少见,未见明显肿胀。结论长脉冲胃电刺激可使糖尿病大鼠体重增加,并改善糖尿病大鼠胃排空延迟;长脉冲胃电刺激能上调IGF-1信号通路的表达,显著增加糖尿病大鼠胃窦Cajal间质细胞的表达并减轻糖尿病对其病理损伤。
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