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近年来,纳米技术为高效特异性的靶向递送化疗药物到肿瘤组织提供了新的途径。蛋白质治疗是一种新兴起的治疗方法,在癌症治疗中表现出广阔的应用前景。然而,临床上蛋白质治疗癌症受到一系列问题的困扰。例如,蛋白质在生理条件下是高度不稳定的,很容易失活。蛋白质的活性受很多因素影响,例如:化学因素、pH改变、温度变化、和酶降解等因素。变性蛋白能引起免疫反应,并对机体产生不良影响。那么如何将蛋白质活性形式运输到靶向部位,进行有效地治疗是科学家亟待解决的难题。如果能将蛋白质治疗和小分子抗癌药物协同治疗癌症,将具有重要的临床意义。本研究的主要内容包括:以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为模板、利用水热法合成核-壳状介孔二氧化硅纳米颗粒(YMSN),对其进行氨基化修饰,再接枝具有硼酸酯键分子保护的Cyt c。最后,修饰靶向分子乳糖酸(LA),形成具有ROS响应性的YMSN-NBC-Cyt c-NBC-LA复合纳米颗粒。这个设计的主要特点是利用硼酸酯键对Cyt c进行保护,Cyt c的细胞毒性在血液运输中,可以有效的被屏蔽,而在肝癌细胞内微环境中Cyt c的活性可以迅速恢复,从而刺激响应性地实现蛋白质治疗和DOX的释放。(1)通过透射电镜、扫描电镜、比表面积孔隙度分析仪、傅里叶变换红外光谱、热重分析和Zeta电位分析仪对复合纳米颗粒的形貌、结构及制备过程进行表征。体外研究药物/蛋白的装载和控释行为,为ROS响应性药物控释系统提供一个理想的平台。(2)体外研究YMSN-NBC-Cyt c-NBC-LA复合纳米颗粒抗癌效率。通过细胞毒性实验(MTT)、颗粒内吞实验(共聚焦显微镜、流式细胞仪)、靶向实验(共聚焦显微镜、流式细胞仪)和凋亡实验(共聚焦显微镜、流式细胞仪、蛋白质免疫印迹)考察复合纳米颗粒的抗癌效率。(3)体内研究YMSN-NBC-Cyt c-NBC-LA复合纳米颗粒抗癌效率。通过一步TUNEL检测试剂盒凋亡染色法、苏木精和伊红染色法(H&E)检测肿瘤组织的形态学变化及凋亡程度,评价复合纳米递送系统体内抗癌效率。结果表明:本文成功制备具有活性氧响应性的负载Cyt c/DOX纳米药物递送系统,该系统能够有效保护Cyt c的生物活性。体外和体内生物学评价都证明,该系统对正常细胞具有良好的生物相容性,对HepG2细胞有强烈的抑瘤效果,为蛋白质治疗肿瘤提供了一定的参考依据。