低温胁迫下白菜型冬油菜的生理响应及ELI基因的表达分析和克隆

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:lxz119110
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研究冬油菜抗寒过程中的抗寒机理,为冬油菜育种提供更多的依据。用不同抗寒级别的冬油菜进行实验,从光合特性、理化性质和抗寒基因表达水平方面进行研究,结果如下:1.在低温胁迫过程中,不同抗寒等级的白菜型冬油菜叶片的光合特性变化趋势相同,但变化程度不同。低温胁迫后,白菜型冬油菜功能叶片的叶绿素含量均呈下降趋势,且抗寒性越强的白菜型冬油菜功能叶片的叶绿素含量降解的越快。光合气体交换参数容易受到温度影响,低温处理后叶片的净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和蒸腾速率(Tr)均下降,但保持一个相对较高的水平,叶片胞间CO2浓度(Ci)上升,缓解了低温下营养物质的消耗,为白菜型冬油菜抗寒提供充足的有机化合物。2.低温胁迫过程中,白菜型冬油菜自身的理化性质发生变化。4℃时,不同抗寒等级冬油菜叶片的丙二醛(MDA)、可溶性糖(SS)、可溶性蛋白(SP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)含量均升高,可溶性糖(SS)、可溶性蛋白(SP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)能有效保护叶片细胞膜结构,避免叶片细胞失水和提高植株叶片细胞流动性,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)能有效降低丙二醛(MDA)含量,缓解对叶片造成的伤害,因此这些理化指标反映了抗寒性的差异。3.对11个转录组筛选到的差异基因荧光定量分析表明,当温度降到4℃时,抗寒性相对较弱的白菜型冬油菜KIN2相对表达量上调,抗寒性相对较强白菜型冬油菜该基因相对表达量下调,OLEO1和ELI相对表达量与KIN2相反,RS281相对表达量上调,且抗寒性强的品种上调的多,LEAD8、MAM1、CYT1、KIN2(1)、CHSY、未知基因和APRR9基因相对表达量均下调。在温度降低过程中,这些基因同时发挥作用提高植物抵御抗寒的能力,减轻低温环境带来的伤害,并且提高自身对低温逆境的抗性。4.通过PCR技术扩增得到白菜型冬油菜Lenox、Neib、天油2号(T2)、天油4号(T4)、陇油6号(L6)、陇油7号(L7)、陇油8号(L8)、陇油9号(L9)ELI基因的cDNA序列。转录组ELI基因碱基序列与Lenox、Neib、天油2号(T2)、天油4号(T4)、陇油6号(L6)、陇油7号(L7)、陇油8号(L8)、陇油9号(L9)克隆的序列同源性高达99.06%。该基因蛋白编码195氨基酸,等电点为9.24;相对分子质量为20.4728kD;编码的蛋白主要由a-螺旋和无规则卷曲组成的疏水性稳定蛋白。8个油菜品种序列比对分析发现:ELI基因存在21处突变。氨基酸序列对比发现有6出突变,其中保守区域陇油8号(L8)有3个突变点,天油2号(T2)、天油4号(T4)、陇油6号(L6)、陇油7号(L7)、陇油8号(L8)和陇油9号(L9)有1个突变点。
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