免疫反应过于强烈与IBD的发生有关，而DC在免疫反应中起提呈抗原及免疫调节的作用，DC是机体免疫反应的始动者，在免疫应答的诱导中具有独特的地位。对DC的研究不仅有助于深刻了解机体免疫应答的调控机制，而且可以通过调节DC的功能来调节机体的免疫应答。第一部分Balb／c小鼠结肠炎模型建立的研究研究方法：统计学分析：使用SPSS10.0软件进行one-way方差分析，Dunnett法进行多重比较，P＜0.05为差异有显著性意义。选用SPF级雌性Balb／c小鼠50只，按随机数字表法分为5组，每组10只，对照组予以300 g／L乙醇溶液灌肠1次；其他4组分别给予含25 mg／kg，50 mg／kg，100 mg／kg，150 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸的300g／L乙醇溶液灌肠1次。各组于造模后3，7，21，28 d各处死1只小鼠，观察结肠的大体形态。造模后21d观察各组小鼠结肠的病理组织切片，并检测中性粒细胞的髓过氧化物酶活性。结果：造模过程中50，100，150 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸组各死亡2，3，3只小鼠。①各组小鼠造模后的一般情况：对照组及25 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸组小鼠发生一过性的结肠机械损伤表现，出现便血等现象，但3～7d后开始缓解；而50～150 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸组小鼠出现便血，腹泻。②各组小鼠结肠的大体形态损伤及病理组织学观察结果：对照组和25 mg／kg2，4，6-三硝基苯磺酸组小鼠肠道在第7天时表现为无粘连，局部充血，肠壁不增厚，未见溃疡，于第3周时局部充血已好转；结肠病理切片大致正常。50～150 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸组小鼠肠道肉眼可见粘连，肠腔增大，充血水肿，溃疡形成，出现肠道增厚，病理切片见黏膜下层水肿，固有层炎症细胞浸润等现象，以上现象于造模4周后开始缓解。其中当2，4，6-三硝基苯磺酸剂量为100 mg／kg时作用达到高峰。③各组小鼠的中性粒细胞髓过氧化物酶活性比较：对照组，25，50，100，150 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸组MPO均数±标准差分别为：0.29±0.12，0.23±0.08，0.85±0.20，1.11±0.14，1.09±0.09，进行Dunett多重比较50，100，150 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸组MPO致均显著高于对照组。结论：应用含100 mg／kg 2，4，6-三硝基苯磺酸的300g／L乙醇溶液灌肠是诱导小鼠结肠炎较为理想的方法。第二部分树突状细胞在小鼠结肠炎中的表型变化及IL-2表达的研究方法：统计学分析：使用SPSS10.0软件进行独立样本t检验，P＜0.05为差异有显著性意义。从小鼠脾脏中提取树突状细胞的研究（一）磁珠分离小鼠脾脏树突状细胞的研究方法CD11c单克隆抗体（N418）对小鼠脾脏树突状细胞上表达的白细胞整合素axb2中的ax亚单位是特异性的，有报道认为CD11c在NK细胞，B细胞，T细胞和小鼠骨髓中的髓样细胞中也有微量表达，应用CD11c磁珠能够快速有效的分离占小鼠脾细胞1％的脾脏树突状细胞。1．样品准备将已分离的脾脏置于6cm平皿内，然后把组织用剪刀剪成小碎片。用注射器活塞将所有溶液（包括碎片和细胞）轻轻通过70um（400目）细胞筛网用15ml离心管收集所有细胞，并加入红细胞裂解液4度5min，离心细胞（1000r，10min），并用buffer冲洗细胞一次（1000rpm，10min）。2．，磁性标记细胞记数（记数板4个角4大格细胞数的平均数乘以10000）。每10×8个细胞加入400ulbuffer（为得到高纯度的DC，在加入磁珠前可加入小鼠IgG1mg／500ul）。加入磁珠100ul／10×8细胞。混匀以后孵育15min，4-8度，加入buffer1-2ml／10×8细胞，离心细胞1200r，10min后用习惯吸去上清液。用500ulbuffer重悬细胞。3．磁性分选把ms柱放入磁场。500ulbuffer湿润柱子。将细胞悬液加入柱子。收集通过柱子的阴性细胞，并用500ulbuffer冲洗柱子，共3次（每次需待液体流尽）。移走柱子，加入buffer1ml，并用配套活塞将阳性细胞从柱子中冲洗出来。如有必要可以重复以上步骤。（二）贴壁法分离小鼠脾脏树突状细胞的研究方法小鼠脾脏树突状细胞是Steiman和Cohn等人于1973年首次分离获得的，早期的方法主要是利用树突状细胞的半粘附性，颈椎脱臼处死健康小鼠，置70％乙醇浸泡2分钟，无菌取出脾脏，置于200目铜网上研碎，RPMI-1640冲洗铜网，并收集细胞悬液，加至r=1.080的细胞分层剂上将已分离的脾脏置于6cm平皿内，然后把组织用剪刀剪成小碎片。用注射器活塞将所有溶液（包括碎片和细胞）轻轻通过70um（400目）细胞筛网用15ml离心管收集所有细胞，并加入红细胞裂解液4度5min，离心细胞，1000rpm，10min，制作成单个核细胞，重悬于5％小牛血清-1640培养液中，使细胞浓度达10⁷／ml，将细胞悬液缓缓加入小鼠淋巴细胞分层液中，1500rpm，10min。吸取界面云雾状细胞层。1640洗涤两次，制作成3-5×106／ml的细胞悬液。置于100mm平皿中，5％CO₂，37℃培养2h，在用1640培养液洗涤一次，除去非黏附细胞，贴壁细胞假如5％小牛血清—1640培养液5％CO₂，37℃培养16h，树突状细胞脱黏附，轻摇之，吸取悬液。将提取出的树突状细胞分别用Fitc-CD11c抗体标记，送检流式细胞术，检测其Fitc-CD11c含量及数量。树突状细胞表型分析的研究方法1：从脾脏中利用CD11c标记的磁珠分离获得树突状细胞后，实验组和对照组各个标本分别直接进行Fitc-CD80，PE-CD86，PE-CD83抗体标记后送检流式细胞术。方法2：将脾脏制作成单个核细胞悬液，去红细胞后，将实验组和对照组各个标本利用CD11c抗体和Fitc-CD80，PE-CD86，PE-CD83抗体联合标记后送检流式细胞术。流式细胞术方法：取大于10⁵个细胞置于尖底管中，分别加入拟标记的荧光抗体，4度孵育15-30min。用PBS离心冲洗细胞一次1000rpm，5min。加入适量PBS待测。若标本放置时间大于3小时，需加入固定液固定。RT-PCR检测树突状细胞白介素-2因子的表达的研究从分离的树突状细胞及同源淋巴细胞及结肠组织中分别提取RNA。引物合成：GAPDH：5’-agacagccgcatcttcttgt-3’，3’-tctccatggtggtgaagaca-5’产物长度361bpIL-2∶5’-aacctgaaactccccaggat-3’，3’-tccaccacagttgctgactc-5’产物长度254bp在匀浆器中研磨，加入1ml Trizol抽打匀浆，移入1.5ml新离心管冰上孵育5分钟，加入0.2 mL氯仿，震荡，冰上孵育5分钟，4℃离心12000g，15分钟。取上层液相移入1.5mL新离心管重，加入等体积异丙醇，震荡，冰上孵育10分钟，4℃离心12000rpm，10分钟，弃去上清液，加入1mL DEPC水处理过的75％乙醇，震荡摇匀，4℃，离心7500rpm，5分钟，弃去上清液，室温下使之干燥。加入DEPC处理水10μL--35μL溶解RNA。走RNA变性电泳观察18s、28s条带，分光光度计检测260／280吸光度比值，计算RNA浓度。取等量的实验组及对照组总RNA（总量不超过500ng）进行RT-PCR反应。取适量PCR产物与5×loading buffer混和后在1.5％琼脂糖，80v电压下进行电泳。结果：1、利用贴壁法检测CD11c阳性细胞含量为43％，数量为10⁵利用磁珠分离方法检测的CD11c阳性细胞为66.1％，而连续使用两根MS柱提纯树突状细胞时，CD11c阳性细胞数达到99％以上。磁珠分选树突状细胞CD11c阳性率较普通贴壁法分选树突状细胞CD11c阳性率高。2、经方法1利用CD11c标记的磁珠从脾脏中提纯树突状细胞后进行流式细胞术，对照组检测Fitc-CD80、PE-CD83、PE-CD86的百分比均数分别为7.6333、6.8100、6.3600，实验组检测Fitc-CDS0、PE-CD83、PE-CD86的百分比均数分别为27.0767、16.0900、27.2500，将Fitc-CDS0、PE-CD83、PE-CD863个参数分别进行两独立样本的t检验，t值分别为-4.395、-4.932、-7.018，p值分别为0.016、0.008、0.018，实验组中DC表面表达的CD80、CD83、CD86的与对照组DC表达水平差异显著，实验组表达高于对照组。经方法2未分离树突状细胞，利用CD11c抗体和Fitc-CD80、PE-CD86、PE-CD83抗体联合标记后进行流式细胞术检测对照组Fitc-CD80、PE-CD83、PE-CD86的百分比均数分别为9.800、7.3250、11.475，检测实验组Fitc-CD80、PE-CD83、PE-CD86的百分比均数分别为14.625、11.7500、14.1500，将Fitc-CDS0、PE-CD83、PE-CD863个参数分别进行两配对样本的t检验，t值分别为-4.416、-3.300、-2.931，p值分别为0.004、0.016、0.038，实验组中DC表面表达的CD11c、CD80、CD83、CD86的与对照组DC表达水平差异显著，实验组表达高于对照组。3、RNA提取浓度实验组为4.732ug／ul对照组为4.488ug／ul，取经过RT-PCR产物电泳，实验组树突状细胞及同源的淋巴细胞表达的IL-2较对照组要高，且实验组结肠组织中IL-2的表达水平较对照组高结论：1、利用磁珠分选树突状细胞CD11c阳性率较普通贴壁法分选树突状细胞CD11c阳性率高，当连续使用多跟MS柱时，阳性率可达99％，是树突状细胞分选提纯的首选方法。2、本研究发现在炎症性肠病疾病模型的小鼠脾脏中树突状细胞表面标志CD80，CD86，CD83较正常组小鼠均有升高，提示树突状细胞已趋于成熟，而树突状细胞成熟度增高提示其抗原提呈功能的发挥。3、本研究发现在整个结肠炎的致病过程中IL-2的表达水平增高，DC中IL-2的表达水平增高，DC参与了分泌IL-2，且淋巴细胞分泌IL-2也增多，在免疫过程中IL-2是属于Th1型致炎因子，DC分泌IL-2与淋巴细胞分泌IL-2一起相互影响，且IL-2又能反馈调节DC的分化，使免疫效应放大，最终引发疾病的发生。