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前言 小管间质的炎症及纤维化程度与肾脏疾病的进展密切相关,阻止或延缓其进程已成为当前肾脏疾病防治战略的关键问题之一。单侧输尿管梗阻(UUO)是研究肾间质纤维化比较成熟的模型,其病理表现为间质内大量基质蛋白积聚和成纤维细胞的增殖。肾间质纤维化是多种因素综合作用的结果,现已知某些局部化学因子及黏附分子(如TNF-α、IL、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1等)的表达增加是导致UUO早期单核巨噬细胞浸润的两个重要因素,这些趋化因子及黏附分子的启动子中均含有核因子-κB(NF-κB)的结合位点,NF-κB的活化调节其转录和表达。提示NF-κB的活性增加可能参与了UUO的发生和发展。近年来,国内外有研究证实,COX-2参与介导了UUO的发生、发展的病理过程,而特异性环氧化酶2(COX-2)抑制剂与传统的非甾体抗炎药比较,确实能减轻UUO大鼠的肾小管间质纤维化病变,但机制不明。本实验通过建立单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化模型,研究特异性COX-2抑制剂代表药物——罗非昔布对该模型大鼠肾脏纤维化的作用,并观察其对肾组织中NF-κB和MCP-1表达的影响。 材料与方法 1.实验动物及分组:雄性Wistar大鼠24只,体重180g-220g,周龄7-9周。随机分为四组:1)模型组,即UUO组(U组)6只;2)罗非昔布治疗组,即UUO+罗非昔布组(R组)6只;3)消炎痛治疗组,即UUO+消炎痛组(I组)6只;4)对照组,即假手术组(C组)6只。U组、R组及I组大鼠行左侧输尿管结扎术,对照组行假手术。手术前24小时开始给药,R组予罗非昔布10mg/kg/d灌胃,I组予消炎痛2mg/kg/d灌胃,共治疗4周,不用药组给予等体积生理盐水灌胃。术后4周末,留取大鼠24小时尿后宰杀大鼠,心脏采血,留取肾脏标本。 2.观察指标 2.1血清肌醉和尿素氮由全自动生化分析仪检测。 2.2尿双BZ浓度用放射免疫法检测。 2.3肾组织普通病理:常规HE、PAS及Masson染色,光镜下观察肾组织形态学改变。 2·4肾脏中NF一KB、MCp一1、TGF一pl及CollV用免疫组化方法检测,采用SABC法。结果采用显微图像分析仪分析。 3.统计学处理 各组数据以均数土标准差(又土s)表示,多组资料间比较采用单因素方差分析,巧D法多重比较组间差异。以P<0.05判断为差异具有显著性。相关分析采用直线相关。所有数据在SPSS(11 .5版本)统计软件包上进行统计处理。结果 1.各组大鼠血清肌配及尿素氮的变化 四周后U组、I组及R组的BUN、scr水平与C组相比均显著升高,差异具有显著性(P<0.05)。其中U组的BUN、Ser水平最高,I组的结果与U组相仿,而R组较U组明显为低(P<0.05),提示肾脏功能损伤较轻。 2.各组尿双BZ浓度的变化 与C组相比,U组、I组及R组的尿TXBZ浓度均大幅度升高,差异具有显著性(P<0.05)。I组和R组的数值较U组均明显下降,以R组下降幅度最大(p<0.02)。 3.肾组织普通病理 对照组无明显病理改变。U组肾小管基底膜明显增厚皱缩甚至断裂,肾小管上皮细胞变性坏死,肾小管萎缩或高度扩张,肾间质间隙明显增宽,间质内有大量炎症细胞浸润,胶原成分明显增加,肾间质纤维化严重。I组与U组未见明显区别,R组肾小管基底膜增厚皱缩,断裂少见,肾间质间隙轻度增宽,间质内可见炎症细胞浸润,胶原成分有所增加,肾间质纤维化轻到中度。 4·肾脏NF一KB、MCp一1、TGF一pl及CollV的表达 U组、I组及R组NF一KB、MCp一l、TGF一p:及ColW的表达均高于C组(P<0.05)。I组MCP一1的表达低于U组,差异具有显著性(P<0.05),而NF一KB、TGF一pl及CollV的表达与U组无明显差异。R组NF一KB、MCP一1、TGF一氏及CdW的表达均低于U组及I组,差异具有显著性(P<0 .05)。结论 1.UUO模型中大鼠应用罗非昔布后,血清肌醉和尿素氮水平明显下降,而应用消炎痛后,其水平较模型组无显著差异。 2.罗非昔布可特异性抑制COX一2的活性,与消炎痛相比,可更显著的减少前列腺素TXB:的产生。 3.罗非昔布可以抑制UUO模型中大鼠肾脏中NF一KB、MCP一1、TGF一pl蛋白的表达并减少细胞外基质中W型胶原蛋白的合成。 4.消炎痛可以抑制UUO模型中大鼠肾脏中MCP一l蛋白的表达。