研究背景注射用双黄连冻干粉是由连翘、金银花、黄芩三味中药提取而成的中药复方制剂,它的主要有效成分是黄芩苷、绿原酸、连翘苷、汉黄芩素。临床上用于外感风热,邪在肺卫,热毒内盛,证见发热,咳嗽气促,咳痰色黄,咽喉肿痛；急性上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃腺炎、轻型肺炎见上述证候者。注射用头孢拉定为第一代头孢菌素,临床上用于敏感菌所致的急性咽炎、扁桃体炎、中耳炎、支气管炎和肺炎等呼吸道感染、泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染等。临床上在治疗细菌合并病毒感染时常联合应用,但两者合用后的安全性评价至今鲜有报道。目的本文通过HL-7702细胞培养的方式,采用检测细胞活性IC50、肝功能生化指标变化、结合细胞形态学观察,全面研究两药单用及合并用药后的肝细胞毒性,并初步探讨合并用药后肝细胞毒性的作用机制。方法与结果1.双黄连冻干粉与头孢拉定合用对HL-7702细胞的毒性实验1.1HL-7702细胞生物学特性的研究绘制HL-7702肝细胞生长曲线,筛选最佳的接种细胞数；用MTT法选择双黄连冻干粉及其与注射用头孢拉定合用后作用HL-7702细胞适宜的浓度。实验分为10组：溶剂对照组,头孢拉定组(0.046mg/mL),双黄连(0.25mg/mL),双黄连(0.5mg/mL),双黄连(1.0mg/mL),双黄连(2.0mg/mL),双黄连+头孢拉定(0.25mg/mL+0.046mg/mL),双黄连+头孢拉定(0.5mg/mL+0.046mg/mL),双黄连+头孢拉定(1.0mg/mL+0.046mg/mL),双黄连+头孢拉定(2.0mg/mL+0.046mg/mL)。1.2双黄连冻干粉与头孢拉定合用对肝功能的影响检测注射用双黄连及其与注射用头孢拉定合用对HL-7702细胞培养液中LDH、AST、 ALT、SOD、MDA含量的影响。与对照组相比随着作用药物量的增加,细胞内的LDH、AST、 ALT的漏出增加,药物作用组SOD含量下降,MDA含量增加(p＜0.05)。1.3双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞形态学的影响采用HE染色的方法观察注射用双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞的形态学影响。较低剂量时细胞间隙增大,呈不规则形状,细胞间连接逐渐消失,并有少量细胞脱落,较大剂量时细胞呈不规则或坏死形态,大量细胞坏死,胞核固缩,胞内形成空泡。与头孢拉定合用后,肝细胞形态异常改变加重。2.双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞中ATP、ADP含量的影响采用高效液相法测定注射用双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用作用HL-7702后细胞中ATP、ADP含量的变化。结果显示随着给药量的加大HL-7702细胞中ATP、ADP的含量逐渐减少,与头孢拉定合用后,这种趋势更加明显。3.双黄连冻干粉及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞HO-1、COX2mRNA表达的影响。用RT-PCR技术检测注射用双黄连及其与头孢拉定合用对HL-7702细胞中HO-1、COX2表达的影响,结果显示随着给药量的增加HO-1、COX2的表达增加,双黄连冻干粉与头孢拉定合用组尤为明显。4.双黄连冻干粉与头孢拉定合用对HL-7702细胞作用的物质基础研究采用高效液相法变换波长测定双黄连冻干粉组中绿原酸、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩素的含量,并测定绿原酸、连翘苷、黄芩苷、汉黄芩素与头孢拉定分别合用作用HL-7702细胞后,检测HL-7702细胞的AST、ALT、ATP、ADP的变化。实验结果显示：连翘苷及其与头孢拉定合用组对AST、ALT的含量影响明显高于其它组,而汉黄芩素对ATP、ADP含量的影响明显高于其他组。结论双黄连冻干粉与注射用头孢拉定合用有一定的肝细胞毒性,这种毒性的作用途径可能通过破坏细胞膜,上调HO-1、COX2的表达,破坏细胞内线粒体实现的,其中连翘苷在破坏细胞膜的完整性方面,汉黄芩素在破坏细胞内线粒体方面较其它成分更为明显。