随着多肽组学成为新近研究的热点以及母乳在新生儿健康成长和疾病预防中的巨大作用,母乳中抗菌肽的研究具有重大的意义,但从人体或者母乳中直接获得抗菌肽成本之大难以预估。本课题首先对早产儿母亲初乳中的内源性多肽进行分离,并检测到了相应的抗菌活性。通过质谱分析预测可能的抗菌肽成分,由于该肽来源于β-酪蛋白,因此将其命名为CN20。通过化学合成的方法获得纯度较高的抗菌肽并进行抑菌实验证明其抑菌作用。为了大量获得抗菌肽,同时降低成本,本课题对CN20进行克隆表达,将合成的CN20基因克隆到pET32a (+)质粒上,将质粒转入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达,随后通过表达条件如诱导剂浓度、诱导温度、诱导时间、诱导转速等条件进行优化获得最佳诱导表达条件。由于CN20的C端加入了一段His标签,因此通过镍柱亲和层析进行蛋白纯化,并通过Western-blot检测。为了切除trxA标签,在标签蛋白与目的蛋白间增加了一段TEV蛋白酶切位点,纯化后的蛋白通过TEV酶切去除标签,获得目的蛋白。最后,对酶切纯化后的目的蛋白进行抗菌活性检测,通过一系列抑菌实验得到该抗菌肽的抗菌谱以及以及抑菌效果与反应时间的关系。综上所述,本课题在母乳中分离获得了一种新型抗菌肽并在大肠杆菌中成功进行表达,且检测到了相应的抗菌活性,为进一步研究乳源抗菌肽的重组表达以及新药的开发奠定了一定的理论及实验基础。