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川金丝猴为我国Ⅰ级保护动物,在圈养条件下由于环境食物等因素发生变化,极易患病,以老年、幼年尤为突出。本研究采用DGGE、荧光定量、16SrDNA高通量技术,对幼年、成年、老年健康川金丝猴肠道菌群进行分析。采集各年龄段川金丝猴粪样,幼年12份、成年13份、老年12份。各年龄段随机抽取4份样品,以带GC夹子的16S rDNAV3区通用引物进行PCR扩增,产物进行DGGE,挑选指纹图谱上共性与特异性优势条带,纯化后送公司检测。结果显示,聚类分析与PCA分析均将幼年、成年、老年川金丝猴明显区分开来;幼年川金丝猴的Shannon指数与丰富度指数显著低于成年、老年(P<0.05),成年、老年之间无显著差异(P>0.05);各年龄段的均匀度指数无显著差异(P>0.05);共性与特异性优势条带共计20条,优势菌群主要集中在Firmicutes(12条优势条带)与Bacteroidetes(5条优势条带)。成年与幼年川金丝猴中Clostridium菌群较为丰富,成年川金丝猴的Prevotella菌群较为丰富,而老年的Ruminococcus菌群较为丰富。各年龄段随机抽取3份样品,以Eubacteria、Lactobacillus spp.、Enterobacteriaceae family、Bifidobacterium s16S rDNA 特异性引物分别进行PCR扩增,产物与pMDTM 19-T Vector连接后导入大肠杆菌DH5α感受态细胞,平板培养筛选出阳性克隆,提取质粒并计算拷贝数,10倍梯度稀释,检测Ct值,建立标准曲线。检测待测样品Ct值,换算出Eubacteria、Lactobacillusspp.、Enterobacteriaceaefamily、Bifidobacterium spp.的数量。结果显示,所构建的各标准曲线均具有很高的相关性(R2>0.99),成功构建标准曲线。幼年样品中Eubacteria的数量极显著少于成年(P<0.01),显著多于老年(P<0.05);成年样品中Eubacteria的数量极显著多于老年(P<0.01),但三者的数量均在同一数量级(1011)。幼年样品中Enterobacteriaceaefamily的数量显著少于成年和老年(P<0.05),成年与老年之间无显著差异(P>0.05)。成年样品中Lactobacillus sp.的数量极显著多于幼年和老年(P<0.01),幼年与老年之间无显著差异(P>0.05)。老年样品中Bifidobacterium spp.的数量极显著少于成年和幼年(P<0.01);幼年极显著少于成年(P<0.01)。幼年12份、成年13份、老年12份样品,送深圳华大基因科技有限公司进行16SrDNA高通量测序。序列经去引物、除杂、去嵌合体质控后,运用软件Qiime 1.8分别对各年龄段样品进行alpha、beta以及物种组成分析。结果显示,37个样品共得到652004条序列,平均每个样品17621.730±6067.612条,平均长度为252bp;按照97%相似度聚合共得到20531条OUT,平均每个样品2376.162±722.155条。Alpha分析中老年与成年川金丝猴shannon指数存在显著差异(P<0.05),幼年与成年无显著差异(P>0.05);各年龄段的chao1值与observed species差异不显著(P>0.05)。PCoA与聚类分析中各年龄段川金丝猴均按区域划分开来。川金丝猴的优势菌群主要在Firmicutes与Bacteroidetes,其中Firmicutes分别占幼年、成年、老年的比例为,62%、70%、83%,老年极显著高于成年与幼年(P<0.01),成年显著高于幼年(P<0.05);而Bacteroidetes分别占幼年、成年、老年的比例为32%、20%、7%;幼年极显著高于成年、老年(P<0.01),成年极显著高于老年(P<0.01)。在纲水平,老年川金丝猴的Clostridia极显著高于幼年、成年(P<0.01),成年显著高于幼年(P<0.05);而幼年的Bacteroidia极显著高于成年、老年(P<0.01),成年极显著高于老年(P<0.01)。在目水平,老年川金丝猴的Clostridiales极显著高于成年、幼年(P<0.01),成年显著高于幼年(P<0.05);而幼年的Bacteroidales极显著高于成年、老年(P<0.01),成年极显著高于老年(P<0.01)。在科水平,老年与成年川金丝猴的Ruminococcaceae极显著高于幼年(P<0.01),成年与老年之间没显著性差异(P>0.05)。综上可知,伴随年龄的增长,幼年、成年、老年川金丝猴肠道菌群的结构有着明显的差异。川金丝猴肠道菌群的多样性随着年龄增加呈现出先增加后减少的趋势。在川金丝猴肠道菌群中,Firmicutes与Bacteroidetes占主导地位,Firmicutes以及其所属优势菌群随年龄增加呈上升的趋势,而Bacteroidetes以及其所属优势菌群随年龄增加呈下降的趋势。