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【目的】分析双阳性(HBeAg+/Anti-HBe+)慢性HBV感染者的临床特征,并检测双阳性感染者血清中HBV核心启动子(Core Promoter,CP)区、前C区(Pre C region,Pre C)、C区基因突变情况,阐明双阳性的分子病毒学特征,为慢性乙型肝炎的诊疗提供理论和实验依据。【方法】1.分析HBeAg/Anti-HBe双阳性慢性HBV感染者的临床特征收集2017年4月至2018年4月就诊于福建医科大学附属第一医院共11,154例慢性HBV感染者信息,其中302例双阳性感染者作为GROUPⅠ,随机抽取905例HBeAg阳性且Anti-HBe阴性(HBeAg+/Anti-HBe-)感染者作为GROUPⅡ,随机抽取1405例HBeAg阴性且Anti-HBe阳性(HBeAg-/Anti-HBe+)感染者作为GROUPⅢ,收集所有患者的HBsAg、HBeAg、Anti-HBe、HBV DNA、肝功能、甲胎蛋白、临床诊断等资料信息。采用Oneway ANOVA、F检验、Kruskal-Wallis H检验、Mann-Whitney U检验、χ~2检验和Fisher确切概率法对三组感染者年龄、性别、HBV DNA等临床特征进行组间差异性分析。2.HBeAg/Anti-HBe双阳性慢性HBV感染者的分子病毒学特征收集2017年4月至2018年4月共60例HBV DNA>500 IU/ml的HBeAg+/Anti-HBe+慢性HBV感染者血清为实验组,随机收集相同时期HBV DNA>500 IU/ml的75例HBeAg+/Anti-HBe-慢性HBV感染者血清作为对照组I,随机收集相同时期HBV DNA>500 IU/ml的104例HBeAg-/Anti-HBe+慢性HBV感染者血清作为对照组II。将血清进行HBV DNA抽提,巢氏PCR扩增HBV CP、Pre C、C区基因并测序。采用t检验、Oneway ANOVA检验、F检验、Kruskal-Wallis H检验、Mann-Whitney U检验、Fisher确切概率法及Pearson相关性分析对三组感染者CP区核苷酸突变率及Pre C、C区氨基酸突变率进行统计分析,以明确双阳性感染者HBV的分子病毒学特征。【结果】1.HBeAg/Anti-HBe双阳性慢性HBV感染者的临床特征慢性HBV感染者中双阳性感染者占2.71%,双阳性感染者年龄分布呈现先增高后减低的趋势,在31~40岁阶段达到峰值(26.49%),男性多于女性(70.00%VS 30.00%)。双阳性感染者HBsAg≥250 IU/ml比例介于HBeAg+/Anti-HBe-和HBeAg-/Anti-HBe+感染者之间(88%VS 92%VS 55%,P<0.001)。双阳性感染者HBeAg滴度[2.99(1.5-6.5)S/CO]较HBeAg+/Anti-HBe-感染者[78.47(6.02-1287.82)S/CO]低(P<0.001)。双阳性感染者Anti-HBe滴度[0.67(0.34-0.93)S/CO]较HBeAg-/Anti-HBe+感染者[0.01(0.01-0.02)S/CO]低(P<0.001)。HBV DNA>500 IU/ml的比例:GROUP II>GROUP I>GROUP III(43%VS 29%VS 23%,P<0.0001)。GROUPⅠ中肝硬化的患者比例较GROUPⅡ高(14.2%VS 10.4%,P<0.01)与GROUPⅢ无显著差异。GROUP I中肝恶性肿瘤的患者比例较GROUPⅡ高(13.9%VS 3.9%,P<0.01),与GROUPⅢ无显著差异。GROUPⅠALT>80 U/L的感染者比例较GROUPⅢ高(20%VS 8%,P<0.0001)。2.HBeAg/Anti-HBe双阳性慢性HBV感染者的分子病毒学特征三组感染者间基因型分布存在显著差异(P<0.0001):实验组B/C基因型分布(50.59%VS 49.12%)与对照组ⅠB/C基因型(50.85%VS 49.15%)分布较一致,对照组II以B基因型占优势(82.81%VS 17.18%)。通过CP区核苷酸序列分析发现:实验组较对照组I在CP区有更高的突变率(1.58%VS 1.12%,P<0.05)。实验组在nt1753、nt1762/1764等与肝脏疾病进展相关的位点出现突变的比例显著高于对照组Ⅰ(nt1753:20%VS 4%,nt1762/1764:47%VS 18%,均P<0.05),累计突变率亦高于对照组Ⅰ、对照组Ⅱ(0.24±0.2 VS 0.12±0.14 VS 0.17±0.17,P<0.05)。随着基础核心启动子(Basic Core Promoter,BCP)区累计突变核苷酸个数增加,HBeAg有降低趋势(r=-0.474,P<0.05)。对Pre C区序列分析发现:仅对照组Ⅱ较实验组在ntG1896A的突变比例更高(P<0.05),其余突变位点均未见统计学差异。对C区序列进行分析发现:实验组氨基酸突变位置多位于与HLA-I或HLA-II相关的抗原肽中。对照组II的C区氨基酸突变较实验组及对照组I明增多(5.42±3.82 VS 2.36±1.70 VS 1.91±1.87,P<0.0001)。【结论】1.HBeAg/Anti-HBe双阳性与患者的肝脏损害和肝脏疾病进展相关。2.HBeAg/Anti-HBe双阳性感染者BCP区存在较多与疾病进展相关的突变位点。3.BCP区核苷酸累计突变与HBeAg滴度呈负相关,较高的BCP区累计突变可能是导致HBeAg/Anti-HBe双阳性形成的原因之一。4.HBeAg/Anti-HBe双阳性感染者C区突变较HBeAg-/Anti-HBe+感染者少。