背景和目的:胃癌是世界第五大最常见的恶性肿瘤,在肿瘤相关疾病死亡原因中高居第三位,每年新增病例近100万。由此带来的经济负担70%落在发展中国家,尤其是亚洲地区。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是胃癌发生最主要的危险因素,目前大多数学者认为Hp感染在经典胃黏膜癌变过程,即非萎缩性胃炎-肠上皮化生-异型增生-胃癌过程中起着始发和推动作用,但Hp感染致病确切机制目前仍不清楚。大量相关研究表明,Hp感染后核转录因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路呈激活状态,NF-κB的活化与Hp相关胃炎、胃溃疡及胃癌的发生发展及生存预后均密切相关。NF-κB是一种多功能核转录因子,静息状态时,NF-κB二聚体p50/p65与其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκB)结合形成复合体,以无活性状态存在于细胞质中。受到外界刺激后,IκB被磷酸化,随后泛素化被蛋白酶体降解,与NF-κB解聚后暴露出NF-κB的核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)从而解除抑制作用,随后p65从胞浆中转入胞核中调控多种基因转录,进而在炎症、免疫、肿瘤中发挥重要作用。因此,阐明Hp感染后NF-κB具体活化及调控机制可为临床胃癌的防治提供新的思路。RACK1是色氨酸-天冬氨酸(tryptophan-aspartic acid 40,WD40)重复序列家族的成员之一,由于该特殊结构,可与胞内多种信号相关蛋白如激酶、膜受体、离子通道、凋亡相关分子及核糖体等结合,从而在炎症、细胞迁移、凋亡及肿瘤发生中发挥重要作用。最新研究发现RACK1是一种新的NF-κB信号通路负性调控因子,并且早在2001年已被证实能够与Hp毒力因子VacA相互作用。因此,我们推测RACK1可能在Hp感染致NF-κB信号通路的激活中发挥一定作用。为此,针对我们提出的假设,本课题采用免疫组织化学检测人体胃黏膜癌变组织,旨在初步探讨RACK1与NF-κB信号通路相关蛋白在Hp相关胃黏膜病变中表达变化及其相关性,并进一步在细胞实验中验证Hp感染后RACK1与NF-κB信号通路相关蛋白变化趋势与组织中是否一致。如实验达到预期,可为进一步阐明rack1在hp感染致nf-κb激活中的作用及机制提供理论基础。研究方法:1.收集慢性非萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生、早期胃癌和进展期胃癌病理标本(每组40例,共200例,前三组中hp阳性与阴性各20例),免疫组织化学方法检测rack1、iκbα和p-iκbα蛋白的表达。2.atcc43504hp菌株(moi=50:1)作用ges-1细胞后,分别于0h、30min、45min、1h、3h和6h不同时间点,采用westernblot方法检测rack1、p65、p-p65(ser276)及p-p65(ser536)蛋白的表达情况。结果:1.人胃黏膜癌变过程中rack1、iκbα和p-iκbα的表达情况及其相关性分析(1)rack1表达:在慢性非萎缩性胃炎组表达最高,随着胃黏膜病变的进展呈下降趋势(p<0.01),在早期胃癌组和进展期胃癌组较低水平表达,两组间差异无统计学意义(75%vs62.5%,p>0.05)。进一步将慢性非萎缩性胃炎组、癌前病变组(肠上皮化生和异型增生)分为hp阳性组和hp阴性组,hp阳性组与hp阴性组各病变阶段rack1表达均呈下降趋势,差异有统计学意义(100%vs87.5%;90%vs90%,p<0.05)。(2)iκbα表达:在慢性非萎缩性胃炎组表达最高,随着胃黏膜病变的进展呈下降趋势(p<0.01),在早期胃癌组和进展期胃癌组表达较低,两组间无显著差异(47.5%vs45%,p>0.05)。将慢性非萎缩性胃炎组、癌前病变组(肠上皮化生和异型增生)分为hp阳性组和hp阴性组,hp阳性组iκbα蛋白各病变阶段间表达均呈下降趋势,差异有统计学意义(100%vs72.5%,p<0.01)。而hp阴性组iκbα表达各阶段无明显差异(85%vs67.5%,p>0.05)。p-iκbα表达:在慢性非萎缩性胃炎组表达最低,随胃黏膜病变进展呈上升趋势(p<0.01),在早期胃癌组和进展期胃癌组较高水平表达,两组间差异无统计学意义(62.5%vs45%,p>0.05)。将慢性非萎缩性胃炎组、癌前病变组(肠上皮化生和异型增生)分为hp阳性组和hp阴性组,hp阳性组各病变阶段p-iκbα无显著性差异(45%vs75%,p>0.05),而hp阴性组中癌前病变组p-iκBα蛋白表达高于慢性非萎缩性胃炎组,有显著差异(40%vs 77.5%,p<0.01)。(3)与Hp感染的关系:将慢性非萎缩性胃炎组、癌前病变组各自分为Hp阳性和阴性组,进行组间比较。结果显示在胃黏膜病变早期阶段,Hp阳性组RACK1显著高于Hp阴性组,差异有统计学意义(100%vs 90%;87.5 vs 90%,p<0.05),而Hp阳性和阴性组间IκBα与p-IκBα蛋白表达无显著性差异(p>0.05)。(4)胃癌组织中RACK1与IκBα、p-IκBα表达的关系:胃癌组织中RACK1与IκBα蛋白表达正相关(p<0.01),与p-IκBα负相关,差异均有统计学差异(p<0.01)。2.Hp作用GES-1后RACK1与NF-κB信号通路相关蛋白表达情况Hp活菌(MOI=50:1)作用GES-1细胞后,RACK1表达量在作用后30min开始升高,3h达到高峰(p<0.01),6h开始下降(p<0.05)。NF-κB信号通路相关蛋白中p65表达无明显变化(p>0.05),而p-p65(Ser276)蛋白表达水平在各时间点均明显升高,30min开始升高,3h达到高峰(p<0.01),6h内均高于0h(p<0.05),p-p65(Ser536)表达水平在3h显著升高(p<0.01),作用6h时仍高于0h(p<0.05),结论:1.RACK1表达下调和NF-κB信号通路活化可能参与了胃黏膜癌变过程。2.Hp感染相关胃粘膜癌变早期RACK1表达上调,这是否参与了Hp相关胃黏膜癌变发生尚待进一步探讨。