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目的1.探讨中医学对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）病因病机的认识,“脾-营-脉相关”理论的内涵及其与AS发病机制的关联。2.阐明健脾通脉方（Jian-Pi-Tong-Mai formula,JPTMF）防治AS的有效性,揭示其调节血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）表型转化抑制AS的发生发展的机制,验证“脾-营-脉相关”理论的科学性与实用性,为临床从脾论治动脉粥样硬化性相关疾病提供理论和实验依据。方法采取理论与实验研究相结合的方式,以理论研究指导并设计实验,通过实验研究反证并支撑理论。1.理论研究:通过查阅、总结古今文献的方式,分析AS的中医学病因病机;从现代医学角度探究AS的病因与发病机制,再将两者结合,以AS中VSMC的表型转化为切入点,阐明“脾-营-脉相关”理论,试论其与VSMC的内在联系,并探讨AS的预防措施与治则治法。2.实验研究:采用高脂喂养的ApoE-/-小鼠构建AS模型,验证JPTMF防治AS的作用机制。在此基础上,采用液质联用技术检测JPTMF含药血清的主要有效成分,通过MTT、划痕修复、Transwell、鬼笔环肽、RT-PCR、Western-Blot与免疫荧光等实验技术,从体外验证JPTMF抑制VSMC增殖、迁移、侵袭及表型转化的作用,并进一步使用慢病毒转染技术,探究JPTMF抑制VSMC表型转化干预AS的分子机制及关键靶点。结果1.基于“脾-营脉相关”理论,部分阐明了 AS发生发展的中医病机演变规律,发现VSMC是该理论生理层面的重要基础,并证实从脾论治在AS的早期尤为重要。2.小动物超声结果显示,JPTMF改善了 AS小鼠主动脉斑块的形成情况,RT-PCR、Western-Blot结果显示JPTMF抑制了 IKK/IKBα/NF-κB信号通路相关指标IKKα、IKKβ、p-IKK、p-IκBα、p-p65的表达。3.MTT、划痕修复与Transwell实验结果显示JPTMF含药血清在体外能够抑制VSMC的增殖、迁移与侵袭;鬼笔环肽实验结果显示JPTMF含药血清在体外能够改善VSMC的骨架形态;RT-PCR、Western-Blot实验结果显示JPTMF含药血清在体外能够抑制 PCNA、MMP-2、MMP-9、OPN 的表达,上调 PPARγ、SM22α、α-SM-actin、SM-MHC的表达。4.Western-Blot实验结果显示JPTMF含药血清在体外抑制了 IKK/IKBα/NF-κB信号通路相关蛋白 IKKα、IKKβ、p-IKK、p-IκBα、p-p65 的表达;Western-Blot、免疫荧光实验结果显示JPTMF含药血清在体外抑制了 NF-κB p65的核移位。5.MTT、划痕修复与Transwell实验结果显示BMS-345541、PDTC在体外能够抑制VSMC的增殖、迁移与侵袭;鬼笔环肽实验结果显示BMS-345541、PDTC在体外能够改善VSMC的骨架形态;RT-PCR、Western-Blot实验结果显示BMS-345541、PDTC在体外能够抑制 PCNA、MMP-2、MMP-9、OPN 的表达,上调 PPARγ、SM22α、α-SM-actin、SM-MHC的表达;Western-Blot实验结果显示BMS-345541、PDTC在体外能够抑制IKK/IKBα/NF-κB 信号通路相关蛋白 IKKα、IKKβ、p-IKK、p-IκBα、p-p65 的表达;Western-Blot、免疫荧光实验结果显示BMS-345541、PDTC在体外能够抑制NF-κB p65的核移位。6.MTT、划痕修复与Transwell实验结果显示沉默IKKα或IKKβ后,JPTMF在体外抑制VSMC增殖、迁移与侵袭能力的作用下降;鬼笔环肽实验结果显示沉默IKKα或IKKβ后,JPTMF在体外改善VSMC骨架形态的作用下降;RT-PCR、Western-Blot实验结果显示沉默IKKα或IKKβ后,JPTMF在体外抑制PCNA、MMP-2、MMP-9、OPN表达,上调 PPARγ、SM22α、α-SM-actin、SM-MHC 表达的作用下降;Western-Blot 实验结果显示沉默IKKα或IKKβ后,JPTMF在体外抑制IKK/IKBα/NF-κB信号通路相关蛋白IKKα、IKKβ、p-IκBα、p-IKK、p-p65表达的作用下降;Western-Blot、免疫荧光实验结果显示沉默IKKα或IKKβ后,JPTMF在体外抑制NF-κB p65核移位的作用下降。结论1.第一,基于脾与脉同气于营卫,结合对AS发病特点的研究提出了“脾-营-脉相关”理论,阐明脾气亏虚、营血不足、脉道不利是AS发病的关键病机,健脾益气、化瘀通脉是早期防治AS的重要治则治法。2.JPTMF能够改善AS小鼠主动脉斑块形成情况,并通过抑制IKK/IKBα/NF-κB信号通路早期干预AS的进展。3.JPTMF在体外能够通过介导IKK/IKBα/NF-κB信号通路抑制VSMC的增殖、迁移、侵袭,调节VSMC表型转化,从而起到干预AS的疗效,其中IKK可能是JPTMF发挥抗AS作用的关键靶点之一。