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目的: 观察内毒素(LPS)和地塞米松(DEX)对大鼠肺泡巨噬细胞生物学特性的影响,探讨肺泡巨噬细胞与炎症的关系。
方法: 用支气管肺泡灌洗法分离培养大鼠肺泡巨噬细胞,设正常对照组(PBS组)、LPS组、DEX组,采用瑞氏-姬姆萨染色观察巨噬细胞形态,MTT法测巨噬细胞活力、透射电镜观察细胞超微结构、流式细胞术测细胞凋亡率、Hoechst染细胞核形态等技术检测LPS和DEX对大鼠肺泡巨噬细胞生物学特性的影响。并应用ELISA法分别测定各组培养的肺泡巨噬细胞24小时后上清液中TNF-α和IL-10的含量。
结果:
(1) 瑞氏-姬姆萨染色LPS组肺泡巨噬细胞体积大,浆丰富,胞核大,贴壁能力强,折光度好;DEX组肺泡巨噬细胞体积小,呈浓缩状,胞浆少,胞核小,贴壁能力弱,易悬浮;PBS组肺泡巨噬细胞呈混合样形态,可见圆形和成纤维状细胞。
(2) MTT 法检测结果示LPS组6h后巨噬细胞明显活力增强(P<0.01);DEX组巨噬细胞活力在24小时明显下降(P<0.05)。
(3) 透射电镜观察到LPS组和PBS组,细胞核膜完整,染色质均匀,细胞生长状态好;DEX组可见形成凋亡小体,还可见凋亡细胞核固缩,细胞染色质边聚明显,核膜表面凹凸不平,较明显的核膜断裂,胞质浓缩减少更为明显并可见大量电子密度高的核碎片、空泡、线粒体变圆、空泡化。
(4) 流式细胞术作周期分析计数凋亡区(亚二倍体区)细胞数量得出凋亡率,LPS组随处理时间延长凋亡率减小,DEX组随处理时间延长凋亡率升高。
(5) Hoechst染色:LPS组和PBS组细胞核呈弥散均匀的蓝色荧光;DEX组染色呈阳性,可见核缩小变形,浓染致密的颗粒块状荧光。(6) DEX组24h上清液IL-10的含量显著升高(P<0.01),LPS组IL-10的含量显著降低(P<0.01);LPS组在24h上清液中TNF-α含量明显增加(P<0.05),DEX组上清液中TNF-α含量明显降低(P<0.05)。
结论: LPS激活的肺泡巨噬细胞,有抗凋亡趋势,有促炎效应。DEX激活的肺泡巨噬细胞,有凋亡趋势,导致炎症消退。