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目的:在糖尿病患者中,95%以上为2型糖尿病(type2 diabetesmellitus,T2DM),其主要特征是胰岛素抵抗。氧化应激是胰岛素抵抗及2型糖尿病发生发展的一个重要原因。 组织细胞中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生过多,超过了抗氧物质的清除能力,ROS致使生物大分子(包括脂质、蛋白质与DNA)氧化,导致氧化应激发生。 骨骼肌胰岛素抵抗是2型糖尿病发生发展的关键。高血糖长期持续刺激,使组织中活性氧生成增多,抗氧化系统功能下降,氧化与抗氧化失衡而产生氧化应激。二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)是Omega-3不饱和脂肪酸,极易被氧化,具有抗氧化性,那么,DHA是否对T2DM大鼠骨骼肌中的氧化应激有改善作用?未见报道。 细胞中的抗氧物质包括还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)等强抗氧化剂和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)和过氧化氢酶(catalase,CAT)等抗氧酶。如果DHA对T2DM大鼠骨骼肌中的氧化应激有改善作用,那么,这种改善是否是通过改变骨骼肌中抗氧酶的活性而实现的呢?未见报道。 基于上述目的,本实验以2型糖尿病大鼠为研究对象,在有无DHA喂养的情况下,观察大鼠骨骼肌组织中的氧化应激及抗氧酶活性的变化情况,为DHA用于2型糖尿病的防治提供实验依据。 方法: 1、动物分组及取材 使用本研究组侯连国等人制备的2型糖尿病大鼠的骨骼肌(股四头肌)为材料。实验动物分为对照组,糖尿病组和糖尿病+DHA组,取各组骨骼肌用于谷胱甘肽(GSH)含量及抗氧酶活性的测定。 2、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的测定 采用黄嘌呤氧化酶法进行测定,结果以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位(U/mg prot)表示。 3、骨骼肌组织中铜锌.超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性的测定 用特异性抑制剂抑制Mn-SOD活性后,再采用黄嘌呤氧化酶法进行测定,结果以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位(U/mg prot)表示。 4、锰-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性的测定 用T-SOD活性减去CuZn-SOD的活性,所得结果可认为是Mn-SOD的活性。结果同样以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位(U/mg prot)表示。 5、谷胱甘肽(GSH)含量的测定 采用二硫代二硝基苯甲酸比色法进行测定,结果以每毫克样本蛋白所含的GSH的量(mg/g prot)表示。 6、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的测定 采用二硫代二硝基苯甲酸比色法测定单位时间内消耗的GSH的量,再计算GSH-PX的活性,结果以每毫克样本蛋白中含有的酶活性单位(U/mg prot)表示。 7、过氧化氢酶(CAT)活性的测定 采用钼酸铵比色法测定单位时间内消耗的H2O2的量,再计算CAT的活性,结果以每毫克样本蛋白含有的酶活性单位(U/mg prot)表示。 结果: 1、总超氧化物岐化酶(T-SOD)活性(U/mg prot) 对照组45.29±6.33,糖尿病组34.76±3.79,糖尿病+DHA组40.05±5.04。糖尿病组与对照组相比,糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD的活性明显降低(P<0.01);糖尿病+DHA组与糖尿病组相比,虽然差异没有统计学意义,但糖尿病+DHA组大鼠骨骼肌中T-SOD的活性有所升高。表明,糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD活性明显降低,而DHA对T-SOD活性的降低有改善的趋势。 2、铜锌-超氧化物岐化酶(CuZn-SOD)活性(U/mg prot) 对照组24.01±4.47,糖尿病组15.78±1.78,糖尿病+DHA组20.96±3.14。糖尿病组与对照组相比,糖尿病大鼠骨骼肌中CuZn-SOD的活性明显降低(P<0.01);糖尿病+DHA组与糖尿病组相比,CuZn-SOD的活性明显升高(P<0.01)。表明,糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD的活性降低可能与CuZn-SOD的活性降低有关,而DHA对T-SOD活性的降低有改善的趋势可能与CuZn-SOD的活性升高有关。 3、锰-超氧化物岐化酶(Mn-SOD)活性(U/mg prot) 对照组23.93(2.97),糖尿病组20.85(1.72),糖尿病+DHA组18.42(0.77)。糖尿病组与对照组相比,糖尿病大鼠骨骼肌中Mn-SOD的活性明显降低(P<0.01);糖尿病+DHA组与糖尿病组相比,糖尿病+DHA组大鼠骨骼肌中Mn-SOD的活性降低(P<0.01)。表明,糖尿病大鼠骨骼肌中T-SOD活性的降低可能与Mn-SOD的活性降低有关,但DHA对Mn-SOD活性的降低没有改善作用。 4、谷胱甘肽(GSH)含量(mg/g prot) 对照组1.85(0.99),糖尿病组2.07(0.76),糖尿病+DHA组2.21(0.35)。糖尿病组与对照组相比,糖尿病+DHA组与糖尿病组相比,骨骼肌组织中GSH含量的差异均没有统计学意义(P>0.05)。表明,DHA不影响糖尿病大鼠骨骼肌中GSH的含量。 5、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性(U/mg prot) 对照组42.12(14.26),糖尿病组40.49(9.69),糖尿病+DHA组36.38(10.74)。糖尿病组与对照组相比,糖尿病+DHA组与糖尿病组相比,骨骼肌组织中GSH-PX活性的差异均没有统计学意义(P>0.05)。表明,DHA不影响糖尿病大鼠骨骼肌中GSH-PX的活性。 6、过氧化氢酶(CAT)活性(U/mg prot) 对照组1.22(0.26),糖尿病组1.60(0.78),糖尿病+DHA组1.24(0.57)。糖尿病组与对照组相比,糖尿病大鼠骨骼肌中CAT的活性升高(P<0.05);糖尿病+DHA组与糖尿病组相比,虽然CAT活性的差异没有统计学意义,但糖尿病+DHA组大鼠骨骼肌中CAT的活性有降低的趋势。表明,糖尿病大鼠骨骼肌中CAT的活性代偿性升高,而DHA对CAT活性的升高有改善的趋势。 结论: DHA可能是通过升高CuZn-SOD的活性,进而使T-SOD的活性升高,以增强2型糖尿病大鼠骨骼肌中的抗氧能力,从而改善组织中氧化应激的。