论文部分内容阅读
血管发生是从已有的血管中形成新生的管道,它对于生物体内很多正常的生理过程来说是至关重要的。1971年Folkman提出了著名的“肿瘤饥饿疗法”,即肿瘤的生长和转移离不开新生血管的形成,氧气从血管中扩散的最大限值是150μm,通过抑制肿瘤新生血管的形成,阻断肿瘤细胞赖以生存的氧气及营养供给,肿瘤细胞便会发生凋亡。此学说的提出为肿瘤的生物治疗提供了新的策略,寻找内源性的血管生成抑制因子成为近年来研究的热点。Hexastatin来源于细胞外基质,是Ⅳ型胶原蛋白α6链的非胶原区NC1,由229个氨基酸组成,分子量是25 kD。近年来研究表明Hexastatin可以通过一种RGD非依赖方式与整合素分子αvβ3结合,调节内皮细胞的黏附和迁移,并且剂量依赖性地抑制内皮细胞的增殖,对新生血管的生成起到显著的抑制作用。另外,实体瘤实验证实Hexastatin还能有力地抑制肿瘤细胞的生长,它在癌组织中含量的下调可以作为肿瘤浸润的重要指标,起到提前预警的作用。本研究从人食管癌EC9706细胞中克隆出Hexastatin基因,在大肠杆菌中进行了可溶性表达,并利用麦芽糖结合蛋白(Maltose Binding Protein, MBP)可专一性结合于直链淀粉(Amylose)亲和树脂的特性,对表达产物作了进一步的纯化。实验结果：经PCR扩增成功获得了687 bp的人Hexastatin基因,测序正确,重组人Hexastatin基因在BL21菌体中获得了高效可溶性表达,表达的可溶性蛋白占总蛋白量的24.8%,纯化后的MBP-Hexastatin融合蛋白纯度可达90%,Western blot证实表达蛋白为目的蛋白。人Hexastatin基因克隆、表达及纯化的成功,为进一步在体内外研究其生物活性奠定了基础,同时也为肿瘤的生物治疗提供了新的方法和途径。