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牛乳中酪蛋白,β-乳球蛋白和α-乳白蛋白是重要的食品过敏原,尤其在婴幼儿中引起过敏反应。本论文制备了牛乳全蛋白,并通过免疫动物制备了特异性识别牛乳蛋白的多克隆抗体,优化建立了牛乳过敏原蛋白问接竞争免疫分析方法,并用于实际样品的检测。分别以牛乳全蛋白,β-乳球蛋白为免疫原免疫动物制备了兔多克隆抗体、鼠抗多克隆抗体。通过对包被量,抗体稀释倍数,蛋白稀释液pH等检测条件的优化,针对牛乳全蛋白和β-乳球蛋白分别建立了问接竞争酶联免疫检测方法。β-乳球蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的工作条件为：包被蛋白0.05μg/we11,封闭液为1%BSA/PBS,抗体稀释倍数为1：10000,蛋白稀释液为pH8.5的PBS, IC50为3.08±0.24μ/mL。交叉实验结果表明,p-乳球蛋白抗体与酪蛋白交叉反应率为1.59%,与其余几种常见食物过敏原蛋白无交叉反应。牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法检测全蛋白的工作条件为：包被量为0.05μg/well,封闭液为1%BSA/PBS,抗体稀释倍数为1：100000,蛋白稀释液为pH8.5的PBS,IC50为3.19±0.17μg/mL,同时该方法可有效检测酪蛋白、6-乳球蛋白、α-乳白蛋白,IC50分别是：酪蛋白3.52±0.46μg/mL,β-乳球蛋白3.91±0.84μg/mL,α-乳白蛋白16.27±0.06μg/mL。交叉试验表明该方法与大豆、芝麻、花生、鸡蛋等几种常见过敏原蛋白无交叉反应,显示了较好的特异性。板内变异系数为0.25%～8.53%,板问变异系数为0.75%-11.72%,证明该方法具有良好的重现性。将牛乳全蛋白间接竞争ELISA方法用于检测白面包,添加回收率为81.79%～95.96%,板内和板问变异系数分别为6.41%～8.93%,0.18～6.70%。饼干的添加回收率为81.17%～89.30%,板内和板问变异系数分别为1.82%～3.52%,3.02～14.11%。说明所建立方法检测结果准确,能有效用于食品中牛乳蛋白含量的准确测定。