目的： 目前启动子甲基化的研究主要集中在单启动子基因调节，多启动子基因调节比单启动子更复杂。孕酮受体(Progesterone Receptor，PR)有两个启动子，其甲基化研究以往多集中在性激素依赖性肿瘤。本实验利用MSP检测白血病中PR双启动子甲基化情况，揭示PR启动子甲基化与PR mRNA表达的关系，同时了解5-Aza CdR诱导DNA去甲基化可能机制；利用脂质体转染技术将DNMT1 mRNA反义寡核苷酸MG88转染白血病细胞株，证明PR表达和PR甲基化与DNMT1表达的关系，为肿瘤的形成与DNA甲基化的关系提供理论依据，从而为肿瘤的治疗提供新的方向。 方法： 1．白血病细胞株HL-60、K562、Jurkat的培养以及5-Aza CdR对细胞株的处理、反义寡核苷酸MG88脂质体转染。 2．利用MSP检测白血病细胞株在5-Aza CdR处理前后、MG88的转染前后PRA、PRB启动子CpG岛甲基化状态。 3．运用RT-PCR检测5-Aza CdR处理前后PRAB、PRB mRNA的表达；运用半定量RT-PCR检测5-Aza CdR处理前后，DNMT1 mRNA的表达以及MG88转染前后PRB、DNMT1 mRNA表达的变化。 4．运用MSP检测44例白血病患者和10例正常人骨髓PRA、PRB启动子CpG岛甲基化情况。 结果： 1．MSP检测白血病细胞株L-60、K562、Jurkat PR启动子甲基化显示：在三株白血病细胞，PRA、PRB启动子CpG岛处于高甲基化状态，而且PRAB、PRB mRNA表达失活。 2．5-Aza CdR处理L-60、K562、Jurkat后，PRA、PRB启动子CpG岛发生去甲基化，PRAB、PRB mRNA恢复表达。 3．白血病细胞株5-Aza CdR处理后DNMT1 mRNA表达较处理前DNMT1 mRNA表达显著降低(p＜0.001)。 4．MG88脂质体转染白血病细胞株，第2天开始DNMT1 mRNA表达与转染前相第三军医大学硕士学位论文比，显著下降勿<0.01)，而随转染时间的延长，刀刀初?了mRNA表达也逐渐降低; 5.MG88脂质体转染白血病细胞株，D刀初72 mRNA表达随MG88浓度的增加而显著降低切<0.01)，MG88转染白血病细胞株的最适浓度为40nM。 6.MG88脂质体转染白血病细胞株，PRB mRNA随D八汤力叮mRNA表达逐渐降低而显著升高(P<0.01)，两者显著性负相关(spearman，r=一0.900，夕=0.037)。 7.MG88脂质体转染白血病细胞株，从第2天开始，PRA、PRB启动子CpG岛出现脱甲基化作用。 8.利用MsP检测44例白血病患者白血病细胞PRA、PRB启动子cpG岛甲基化情况，结果PRA、PRB甲基化阳性率分别为65.9%、61.4%，而正常人RPA、PRB却没有发生甲基化。有3例患者，PRA出现高甲基化，而PRB没有出现甲基化;另有1例患者PRB出现高甲基化，而PRA却没有出现甲基化;有5例患者PRA/PRB出现部分甲基化。结论: 1.白血病细胞株孕酮受体两个亚型PRA、PRB启动子cpG岛是处于高甲基化状态，而且两个亚型mRNA都不表达。 2.用5一Aza CdR处理白血病细胞株后，PRA、PRB启动子cpG岛发生去甲基化，PRB mRNA出现表达，说明PRB启动子甲基化导致PRB mRNA表达失活。 3.通过对5一Aza CdR处理前后D瓦忆刀mRNA的分析，结果发现5一Aza CdR可 能是通过降低DNMTI的表达而诱导DNA去甲基化。 4.反义寡核营酸MG88可以降低白血病细胞株D刃彻7了mRNA的表达，随MG88 作用时间和浓度的增加，D瓦U刀mRNA表达逐步降低。 5.MG88可以使白血病细胞株PRA、PRB启动子cpG岛发生去甲基化作用;pRB mRNA的表达随MG88转染时间的延长而逐步升高。可以得出结论:在白血病 中，PRB启动子甲基化和PRB表达“沉寂”与D汉材刀mRNA高表达有关，MG88 的作用为后生性调节紊乱的治疗提供了新的方向。 6.白血病患者骨髓标本PRA、PRA启动子CpG岛发生甲基化分别为65.9%、 61.4%，而正常人没有发生甲基化。PRA或/和PRB启动子甲基化有可能成为白血病 诊断的潜在的标志物。