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HarpinXooc蛋白来源于植物病原细菌X.oryzae pv.oryzicola，与其他Harpin相同，它也是不亲和病原细菌在烟草等植物上诱导HR或者HCD的效应分子。同时，HarpinXooc编码基因hrf2位于hrp基因簇中，受hrp基因的调控。目前研究表明，由于Harpin蛋白能够作为蛋白激发子与非寄主植物进行互作，激活多条信号通路，诱导多种抗性机制，因此，外施Harpin可以诱导植物抗虫，抗病，抗旱，还可以促进植物生长。但是，目前Harpin蛋白的受体尚未得到克隆，Harpin蛋白与植物如何互作也不清楚。X射线晶体衍射分析法是蛋白进行结构和功能研究的主要方法之一。而X射线晶体衍射分析法的前提是获得高质量的蛋白晶体。本研究通过对HarpinXooc蛋白纯化结晶条件的研究，为克隆鉴定Haprin蛋白受体提供了理论基础。 本研究为了制备合适的HarpinXooc蛋白结晶样品，将pET-30a-hrf2转入BL21大肠杆菌，IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE结果表明其表达产物是分子量为21 kDa左右的融合蛋白质。菌液离心后取上清破碎，超速离心去除细胞膜等杂质，然后将含有蛋白的上清液与镍柱结合并用不同浓度的咪唑进行洗脱，洗脱液浓缩后使用凝胶过滤层析进行纯化，最后使用肠激酶进行酶切，然后通过镍柱去除组氨酸标签，最终获得高纯度并符合结晶要求的蛋白。经过换算，每升pET-30a-hrf2发酵液经纯化后，可提纯得到HarpinXooc蛋白约8 mg。此外，本研究通过对小鼠进行三次免疫获得了高效价的HarpinXooc多克隆抗体，为Harpin蛋白与非寄主植物互作时受体的定位及鉴定和外源表达Harpin蛋白转基因作物的检测提供了基础。 为了解析HarpinXooc蛋白的二级结构，本研究对HarpinXooc蛋白以及其功能域片段HarpinXooc(1-94)进行远紫外光谱分析。HarpinXooc(1-94)是由HarpinXooc蛋白的1-94号氨基酸构成，远紫外光谱分析结果显示HarpinXooc蛋白主要以α-螺旋结构为主，各结构比例为:α-螺旋45％，β-折叠2.3％，β-转角9.49％，无规则卷曲42.1％。同时远紫外光谱分析结果表明HarpinXooc(1-94)蛋白也主要以α-螺旋结构为主，各结构比例为:α-螺旋40.7％，β-折叠7.4％，β-转角13.8％，无规则卷曲36.8％。同时，本研究还使用了SOPMA软件对二级结构进行了对比，两个结果基本一致。此外，温度的回复实验显示两个蛋白在温度升高的条件下，结构均有所变化，但是温度下降又基本可恢复到之前的结构，两个蛋白都有比较好的热稳定性，但是HarpinXooc(1-94)的更好，在40℃之前结构基本没有变化，因此HarpinXooc(1-94)可能更有利结晶。 本研究通过检测HarpinXooc蛋白在不同温度以及不同pH条件下的稳定性，初步筛选了HarpinXooc蛋白的结晶条件，然后使用坐滴法(sitting drop)，利用Hampton公司的七种试剂盒在不同温度(4℃，22℃)不同浓度下（1-10 mg/mL）进行了结晶。在试剂盒Crystal Screen HT和MembFac HT（Hampton），蛋白浓度为4mg/mL，温度22℃这样的条件下本研究获得了HarpinXooc的微晶体，为后期获得能够进行X射线衍射分析的高质量晶体奠定了基础。