目的:结直肠癌是发病率及死亡率较高的恶性肿瘤之一。我国作为主要发展中国家,随着老龄化,生活方式、居住环境的改变,结直肠癌的发病率及死亡率呈增长趋势。癌细胞无限制地自我增殖及广泛侵袭转移的生物学特点是导致疾病恶化,患者死亡的主要原因。PINCH蛋白(Particularly interesting new cysteine-histidine rich protein,PINCH)是LIM蛋白家族中的一员,1994年被发现,能与整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)和Nck-2结合,起沟通整合素信号传导通路和生长因子信号传导通路的作用。在肿瘤浸润的边缘的基质中高表达,被认为是判断肿瘤预后的独立危险因素。脑膜瘤相关蛋白-30(Meningioma-associated protein-30,MAC30),1993年被发现。在人体多种肿瘤中表达水平不同,与正常组织存在差异。在结直肠癌中高表达,与肿瘤预后相关,具体作用机制研究中。本研究采用RT-PCR(Reversed Transcript PCR)方法分别测定不同标本在结直肠癌、癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织中的PINCH和MAC30 mRNA表达水平的差异,初步分析PINCH和MAC30各自在结直肠癌的发生、发展中的作用;分析PINCH和MAC30的各自表达情况与结直肠癌临床病理特征间的关系;分析PINCH和MAC30在癌组织中表达的相关性及其意义。方法:收集河北医科大学第一医院及河北唐山工人医院2008年11月~2010年3月结直肠癌住院行结直肠癌根治术手术病人标本80例。所有病人术前均未行放、化疗及免疫治疗。收集病人的性别、年龄、Dukes分期、肿瘤位置、组织学类型、淋巴结状态、浸润深度、分化程度等临床病理资料。全部患者80例均行PINCH mRNA检测,其中男性49人,女性31人。年龄37~90岁,中位年龄66岁。55人行MAC30 mRNA检测,其中男性35人,女性20人。年龄38~90岁,中位年龄66岁。实验分组按标本取材分为结直肠癌组、癌旁(2cm)无瘤黏膜组、近端正常黏膜组和远端正常黏膜组织组。结果:1 PINCH mRNA在结直肠癌、癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织的表达(Fig.1~2 Fig,4): PINCH mRNA在结直肠癌组织中的表达量较癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织的表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);而在癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织中的表达无明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。2 MAC30 mRNA在结直肠癌、癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织的表达(Fig.3 Fig.5) :MAC30 mRNA在结直肠癌组织中的表达较癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织的表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);而在癌旁无瘤黏膜、近端正常黏膜和远端正常黏膜组织的表达无明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。3癌组织的PINCH mRNA与结直肠癌临床病理特征的关系(Table1):PINCH mRNA的表达与性别不相关。男性组中相对灰度值(PINCH/β-actin)为0.678±0.378,女性组中相对灰度值为0.772±0.459,两者相比较,P=0.319,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与年龄不相关。<60岁组中相对灰度值为0.720±0.429,≥60岁组中相对灰度值为0.699±0.404,两者相比较,P=0.823,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与肿瘤位置不相关。结肠组中相对灰度值为0.816±0.510,直肠组中相对灰度值为0.635±0.293,两者相比较,P=0.051,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与组织学类型不相关。非黏液癌组中相对灰度值为0.682±0.349,黏液组癌/印戒细胞癌组中相对灰度值为0.716±0.445,两者相比较,P=0.74,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与淋巴转移情况不相关。无淋巴结转移组中相对灰度值为0.689±0.407,淋巴结转移组中相对灰度值为0.742±0.419,两者相比较,P=0.569,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与浸润深度不相关。黏膜层+肌层组中相对灰度值为0.544±0.324,浆膜层+脂肪层组中相对灰度值为0.747±0.417,两者相比较,P=0.191,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与分化程度不相关。高、中分化组中相对灰度值为0.661±0.369,低分化组中相对灰度值为0.794±0.439,两者相比较,P=0.191,大于0.05,无统计学意义。PINCH mRNA的表达与Dukes分期相关。A+B+C期组中相对灰度值为0.736±0.424,D组中相对灰度值为0.525±0.200,两者相比较,P=0.028,小于0.05,存在显著性差异。此次试验结果提示结直肠癌组织中PINCH mRNA的表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、组织学类型、淋巴结转移、浸润深度、分化程度不相关,而与重新分组后的Dukes分期相关。4癌组织的MAC 30与结直肠癌临床病理特征的关系(Table2):MAC mRNA的表达与性别不相关。男性组中相对灰度值为0.532±0.358,女性组中相对灰度值为0.544±0.301,两者相比较,P=0.895,大于0.05,无统计学意义。MAC30 mRNA的表达与年龄不相关。<60岁组中相对灰度值为0.568±0.298,≥60岁组中相对灰度值为0.520±0.356,两者相比较,P=0.626,大于0.05,无统计学意义。MAC30 mRNA的表达与肿瘤Dukes分期不相关。Dukes A+B+C期组中相对灰度值为0.547±0.340,D期组中相对灰度值为0.451±0.313,两者相比较,P=0.561,大于0.05,无统计学意义。MAC30 mRNA的表达与组织学类型不相关。非黏液癌组中相对灰度值为0.504±0.321,黏液组癌/印戒细胞癌组中相对灰度值为0.620±0.378,两者相比较,P=0.253,大于0.05,无统计学意义。MAC30 mRNA的表达与淋巴转移情况不相关。无淋巴结转移组中相对灰度值为0.541±0.312,淋巴结转移组中相对灰度值为0.529±0.471,两者相比较,P=0.895,大于0.05,无统计学意义。MAC30 mRNA的表达与分化程度不相关。高、中分化组中相对灰度值为0.502±0.311,低分化组中相对灰度值为0.617±0.313,两者相比较,P=0.371,大于0.05,无统计学意义。MAC30 mRNA的表达与肿瘤位置组及浸润深度有关。前者结肠组与非结肠组的相对灰度值分别为0.677±0.419,0.412±0.162,比较后P=0.005。后者黏膜层+肌层组中相对灰度值为0.404±0.115,浆膜层+脂肪层组中相对灰度值为0.571±0.364,两者相比较,P=0. 014。两组别中P值均小于0.05。此次试验结果提示结直肠癌组织中MAC30 mRNA的表达与患者性别、年龄、Dukes分期、组织学类型、淋巴结转移、分化程度不相关(P>0.05)。而与肿瘤位置和浸润深度有关。5结直肠癌组织中的PINCH与MAC30的mRNA表达量相关性分析:将结直肠癌组织中的PINCH及MAC30 mRNA表达量进行Spearman相关性检验,结果发现,二者呈正相关r=0.275,P =0.048 (Fig.6)。随后分别将PINCH和MAC30 mRNA的表达量以均数为界分成高表达组和低表达组进行分析。以PINCH mRNA表达量的均数为界,对其中MAC30 mRNA表达量以Mann-Whitney Test分析。PINCH mRNA高表达组MAC30 mRNA表达量为0.673±0.386,平均秩次为32.35;PINCH mRNA低表达组MAC30 mRNA表达为0.484±0.307,平均秩次为23.66;非参数检验结果:Z=-1.941,P=0.052。示MAC30 mRNA在PINCH mRNA高表达组中的表达量较低表达组的表达量有增高趋势(Fig 7)。以MAC30 mRNA表达量的均数为界分组后,对其中PINCH mRNA表达量行Mann-Whitney Test分析。MAC 30 mRNA高表达组PINCH mRNA表达为0.823±0.502,平均秩次为30.88;MAC 30 mRNA低表达组PINCH mRNA表达为0.635±0.429,平均秩次为21.2;非参数检验结果:Z=-2.086,P=0.037。示PINCH mRNA在MAC30 mRNA高表达组中的表达量较低表达组的表达量高,存在显著性差异(Fig 8)。结论:PINCH和MAC30与结直肠癌的发展及侵袭密切相关,二者共同在这一过程中发挥作用,PINCH和MAC30的高表达可以成为判断癌细胞浸润的重要指标。