鹿茸是雄性鹿科动物的第二性征，是唯一可以完全再生的哺乳动物附属器官。鹿茸发生是指雄性仔鹿进入青春期后角柄和初角茸的形成过程。鹿额外脊上的生茸区骨膜(AntlerogenicPeriosteum，AP)是鹿茸发生的组织基础。AP包含了鹿茸器官发育的蓝图。雄激素在鹿茸发生中起到重要作用，AP只有受到雄激素刺激以后才能发育形成角柄和初角茸。　　Li.C等研究发现仔公鹿去势则导致鹿茸发生失败，如果注射外源性雄激素则会使去势仔鹿的AP重新发育形成角柄进而成为鹿茸;同时雌鹿也有AP发育为角柄的潜力，但雌鹿因没有足够的雄性激素刺激而无法表达这一性状。雄激素是刺激鹿茸发生的先决条件，AP发育生长为鹿茸这一过程具有雄激素浓度的依赖性。AP发育形成鹿茸角柄是由体内雄激素水平的增加引起的，AP发育与睾酮浓度的变化密切相关。为探索鹿茸生长过程中有无雄激素刺激AP蛋白表达的差异，利用2D DIGE技术筛选生茸区骨膜发育前后的差异蛋白。深入研究鹿茸生茸区骨膜发育蛋白质组学，将为揭示鹿茸发生的分子机制提供基本根据。　　1.雄激素诱导雌性梅花鹿生茸区骨膜发育　　选取两头健康一岁龄幼母鹿，试验组雌鹿注射外源性雄激素（十一酸睾酮），对照组注射用于溶解雄激素的茶树油，二者皆为每隔一周注射，持续一个月后，利用角柄发生检测器检测鹿茸角柄是否发育，采集生茸区骨膜进行HE染色。结果显示试验组雌鹿鹿茸生茸区骨膜发育，发育的AP细胞层明显增厚。对照组生茸区骨膜未见发育，梅花鹿母鹿同公鹿一样具有生发角柄和鹿茸的组织学基础，雄激素是调控鹿茸生长的关键因子，人工诱导母鹿生茸区骨膜发育是研究鹿茸生长调控机制的优良模型。　　2.鹿茸生茸区骨膜发育前后差异表达蛋白的蛋白质组学分析　　提取梅花鹿母鹿生茸区骨膜发育前后样品骨膜组织总蛋白，2D DIGE试验和质谱鉴定;总结质谱鉴定结果数据，对差异表达的组织蛋白进行生物信息学分析。通过生茸区骨膜组织总蛋白的2D DIGE分析，具有统计学意义(p＜0.05，差异倍比≥1.5)的差异蛋白质点318个，其中有163个蛋白在发育后的生茸区骨膜蛋白中上调表达，155个蛋白在发育后的生茸区骨膜中下调表达。最终鉴定出17个可用的组织差异蛋白，按功能分类主要有结合相关蛋白，酶调活性相关蛋白，结构分子活性相关蛋白，催化活性相关蛋白，抗氧化活性相关蛋白。获得部分差异明显的生茸区骨膜发育前后骨膜组织蛋白组表达谱，与未发育生茸区骨膜相比，在发育后的生茸区骨膜蛋白中有10个骨膜蛋白下调表达，有7个骨膜蛋白上调表达，这些蛋白很有可能参与了生茸区骨膜的发育过程，是触发鹿茸形成的关键蛋白，发现14-3-3ε、GSN、COL6A2、ERBBFI1等蛋白与鹿茸发生过程密切相关。　　3.生茸区骨膜发育相关蛋白14-3-3ε蛋白基因的克隆及生物信息学分析　　梅花鹿YWHAE基因编码区核苷酸全长768 bp，编码255个氨基酸，氨基酸水平上与牛相似性高达99.6％;氨基酸序列分析表明鹿YWHAE基因编码的14-3-3￡蛋白相对分子量为29163.86Da，主要定位在细胞质内，属于可溶性蛋白;预测鹿14-3-3ε蛋白氨基酸含有19个磷酸化位点、无糖基化位点;其二级结构以螺旋为主，三级结构呈弯曲螺旋状态。14-3-3ε为重点蛋白，通过细胞迁移和细胞稳定性来调控鹿茸生长;采用PCR方法扩增梅花鹿14-3-3ε蛋白基因并进行测序分析，试验确定梅花鹿YWHAE基因表达的14-3-3蛋白具有高度保守性。