背景与目的:大肠癌的发生与多种信号转导通路的功能异常有关,其中的Ras/MAPK信号转导通路是细胞外信号由膜外受体通过一系列基因诱发细胞核内反应的重要通路,其上游的EGFR基因是一种跨膜糖蛋白,在多种肿瘤包括大肠癌中均存在高表达。处于EGFR下游的K-ras癌基因为细胞外信号从EGFR传至胞内的中介,在大肠癌中被认为是启动癌变的关键基因之一,其主要以点突变的方式活化,且常见的突变位点位于第2外显子第12、13密码子中。大量研究表明,EGFR、K-ras基因与大肠癌的发生发展关系密切,但与大肠癌具体生物学行为间的关系的结论并不一致,且目前国内外将两者结合用于在大肠癌中的蛋白表达的研究尚未见报道。本研究通过检测大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏膜中EGFR、Ras蛋白的表达情况,以及他们与临床病理特征的关系,旨从蛋白水平探讨两基因在大肠癌发生中的作用。另外通过分析部分大肠癌组织中K-ras基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性,进而从基因水平探讨K-ras基因在大肠癌发病中的作用机制。方法:诊断明确的大肠癌手术切除标本115例,其中43例取癌旁黏膜组织(距肿瘤边缘≥5cm),另取内镜下切除大肠腺瘤标本36例。应用免疫组织化学方法检测EGFR、Ras蛋白在大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏膜组织中的表达,分析两种蛋白表达与临床病理间的关系;从115例大肠癌组织中随机选取70例,用PCR扩增-直接测序法检测K-ras基因第2外显子12、13密码子突变,分析K-ras基因突变对Ras蛋白表达的影响及临床意义。结果:1.EGFR蛋白阳性表达率在大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏膜组分别为62.61%(72/115)、30.56%(11/36)与12.77%(6/47),三者间有显著性差异(P<0.05);Ras蛋白阳性表达率在大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏膜组分别为46.09%(53/115)、38.89%(14/36)与10.63%(5/47),前两者明显高于后者(P<0.05)。2.在大肠癌浸润深度达黏膜下层和肌层、浆膜下层及侵透浆膜层组EGFR蛋白阳性表达率分别为36.84%(7/19)、67.09%(53/79)与70.59%(12/17),后两者明显高于前者(P<0.05)。EGFR蛋白表达与大肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、有无淋巴结转移及远处转移无明显相关性(P>0.05)。3.在低分化癌与高中分化癌组中Ras蛋白的阳性表达率分别为59.52%(25/42)与38.36%(28/73),两者有显著性差异(P<0.05)。Ras蛋白的表达与大肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、有无淋巴结转移及远处转移无明显相关性(P>0.05)。4.大肠癌中EGFR、Ras蛋白的表达呈正相关(r=0.354,P<0.05)。5.选取的70例大肠癌中K-ras基因突变率为30%(21/70);其中第12位密码子突变占66.67%(14/21),突变位点均位于K-ras基因第l2位密码子第2位碱基上(G→T突变8例,G→A突变4例,G→C突变2例;G→T、G→A、G→C突变率分别为38.10%,19.05%,9.52%);第13位密码子突变率为33.33%(7/21),突变位点位于K-ras基因第l3位密码子第1、2位碱基上(G→T突变4例,G→C突变2例,另一例有G→T和G→A两种突变;G→T、G→A、G→C突变率分别为19.05%,4.76%,9.52%)。K-ras基因突变在男女性别组的阳性率分别为20.93%(9/43)与44.44%(12/27),两者有显著性差异(P<0.05)。K-ras基因突变与大肠癌患者年龄、肿瘤部位、浸润深度、有无淋巴结转移及远处转移无明显相关性(P>0.05)。6.K-ras基因突变与Ras蛋白表达成正相关(r=0.237,P<0.05)。结论:1.癌旁黏膜、大肠腺瘤与大肠癌中EGFR和Ras蛋白表达依次上调,提示两者与大肠癌的发生有关。2.大肠癌组织中EGFR蛋白的表达与肿瘤浸润深度呈正相关。3.大肠癌组织中Ras蛋白的表达与肿瘤分化程度呈负相关。4.EGFR与Ras蛋白表达呈正相关,提示联合检测两基因有助于大肠癌的诊断及预后评估。5.大肠癌中K-ras基因12密码子G→T和G→A突变是主要的突变方式。12密码子的突变可能为Ras蛋白增多的原因。