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禽多杀性巴氏杆菌是引起食源性动物呼吸道感染的一种重要的病原菌，给养殖业造成了巨大的经济损失。目前，控制禽巴氏出血症的疫苗主要有灭活疫苗和减毒活疫苗。但这些传统疫苗的保护效果并不理想。DNA疫苗制备方便、结构稳定，可在动物体内持续诱导体液免疫与细胞免疫应答。壳聚糖是一种生物可降解性的天然多糖，可保护DNA免受核酸酶的降解，在基因转导方面有巨大的潜力。因此壳聚糖DNA纳米疫苗成为当前DNA疫苗的研究热点。 本文以该基因为研究对象，通过PCR扩增该基因，采用BamHⅠ、EcoRⅠ进行双酶切，并将其导入真核表达载体的多克隆位点，构建并扩增该重组质粒，与0.02％的壳聚糖溶液混合，通过复凝聚法制备壳聚糖-PtfA纳米疫苗。采用凝胶阻滞试验、透射电镜观察，确定最佳N/P比；将该疫苗免疫小鼠，间接 ELISA法检测小鼠血清抗体水平、MTT法外周血淋巴细胞增殖率、试剂盒法测定IFN-γ分泌水平及该疫苗的免疫保护率。试验结果表明，以 N/P比为2.5制备的壳聚糖-pcDNA3.1(+)/PtfA纳米颗粒，85%的颗粒呈规则的球状，包封率高、大小均一，其粒径在200nm左右；免疫后，壳聚糖-重组质粒组、重组质粒组小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖率含量显著高于生理盐水组、空载体组及其壳聚糖复合物组（p<0.01），且壳聚糖-重组质粒组略高于重组质粒组；这两组 IFN-γ含量分别达到了359.31ng/L、310.14ng/L，极显著高于另外三组；攻毒后，壳聚糖-重组质粒组的免疫保护率达到了75%，显著高于其它四组。表明本试验已成功构建出壳聚糖-pcDNA3.1(+)/PtfA纳米DNA疫苗，为禽巴氏杆菌病的治疗奠定了一定的基础。