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目的:研究丹参酮ⅡA对高糖诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用,及与
MAPK信号传导通路的关系;并对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法进
行探讨,建立糖尿病大鼠血管平滑肌细胞模型。
方法:1)取正常大鼠主动脉,用组织贴壁法做血管平滑肌细胞的原代培养,以
及用STZ制作糖尿病大鼠模型并做糖尿病血管平滑肌细胞的原代培养,用二步
法进行SMA免疫组织化学染色来鉴定细胞;2)MTT法建立TSN的毒性试验标
准曲线;3)BrdU掺入DNA的ELISA法测定细胞DNA合成;4)荧光酶标仪的
方法检测细胞内游离钙离子的含量,同位素示踪法测定MAPK的活性。
结果:1)原代培养的大鼠血管平滑肌细胞通过SMA免疫组织化学染色后发现其
平滑肌细胞特有的肌纤维,确定所培养的细胞为血管平滑肌细胞;2)高糖可诱
导血管平滑肌细胞增殖和DNA合成,且呈剂量和时间依赖性;同时可刺激平滑
肌细胞内游离钙离子浓度升高及MAPK活性增强;3)丹参酮ⅡA对高糖诱导的
血管平滑肌细胞的增殖和DNA合成呈现显著的抑制作用,而且降低了细胞内钙
离子的浓度和MAPK水平;4)建立糖尿病大鼠模型一个月后做血管平滑肌细胞
原代培养,发现其呈现异常快速增殖状态,且细胞内MAPK活性较高,使用TSN
后,可明显抑制此现象。
结论:1)丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖及DNA合成具有明显抑
制作用的机理可能是其阻断了MAPK信号传导通路。2)糖尿病大鼠血管平滑肌
细胞呈现异常快速增殖状态。