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禽多杀性巴氏杆菌病又名禽霍乱（Fowl Cholera）,是由禽多杀性巴氏杆菌（Avian Pasteurella multocida）是引起的出血性败血症,通常以急性禽霍乱为主。临床症状早期可能不明显,直到感染晚期才表现出精神抑郁、羽毛蓬松、发烧、厌食、口腔有粘液分泌物、腹泻和呼吸急促,最后发生衰竭,猝死,极大的危害家禽养殖行业的发展。当前,预防禽Fowl Cholera的方法主要应用抗生素、灭活苗、亚单位疫苗和弱毒苗。抗生素的滥用导致大量耐药菌产生,现有疫苗免疫效果不理想,因此研发出一种具有高免疫原性疫疫苗对家禽养殖行业有重要意义。菌影是由细菌细胞内容物外流,细菌内部形成空洞,外部形态和抗原决定簇保持完整,具有较好免疫原性的细菌空壳。本试验通过PCR扩增噬菌体裂解基因E和金黄色葡萄球菌核酸酶A基因SN,采用融合PCR以15个柔性氨基酸将裂解基因串联起来形成E-15aa-SN（ES）,再克隆到温敏质粒PBV220,得到温敏裂解质粒PBV-E和PBV-ES。以PBV-ES为模板,PCR扩增温敏裂解片段,克隆到大肠杆菌—巴氏杆菌穿梭质粒中,得到温敏裂解穿梭质粒pBA1100-DLS-E和pBA1100-DLS-ES。通过电转化的方法,将温敏裂解穿梭质粒转化到制备好的禽多杀性巴氏杆菌电转感受态细胞中,得到重组菌。经上海生工测序同源性达100%。28℃低温培养重组菌,42℃诱导表达收集菌影。通过测定重组菌诱导生长曲线和活菌计数,双裂解菌影裂解效率最高达到99.9998%,说明成功构建菌影。利用改良Karber法测定禽多杀性巴氏杆菌C48-1的半数致死量LD50是0.523。在重组菌株最优裂解条件下,即单裂解重组菌在升温诱导第3 h收集菌影,双裂解重组菌在升温诱导第2 h收集菌影。以10倍LD50剂量攻毒经过甲醛灭活苗、单裂解菌影苗和双裂解菌影苗免疫2次的60日龄大小的江汉鸡,对照组注射等剂量的PBS溶液。结果显示,攻毒后对照组全部死亡,甲醛灭活苗保护率为70%,单裂解菌影苗保护率为80%,双裂解菌影苗保护率为90%,说明菌影苗对江汉鸡有一定保护作用,且免疫效果比普通甲醛灭活苗好。