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目的：阐明调控辅激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1(coactivator-associated arginine methyl-transferase1, CARM1)基因表达的分子机制,探索其通过何种作用方式参与冠心病的发生,试图揭示该基因在冠心病发生中的作用及机制,为冠心病的预防和治疗提供新的靶点。方法：1)利用real-time PCR和Western blot方法分别在mRNA和蛋白水平上检测冠心病病例和对照的外周血单个核细胞(PBMCs)中CARM1的表达水平；2)综合利用HapMap数据库中连锁不平衡(LD)分析和“DNA元件百科全书”(ENCODE)的功能注释数据,筛选CARM1基因上下游10kb内位于不同LD区域中的潜在功能性单核苷酸多态性(SNP)；在234例健康个体的PBMCs样本中检测CARM1mRNA的表达水平,分析其与SNP基因型的关系；对影响CARM1表达的SNP进行生物学功能研究：应用双荧光素酶报告基因系统检测等位基因特异性的转录激活活性,利用电泳迁移率变更实验(EMSA)、多种转录因子冷竞争实验(MC-EMSA)、电泳超迁移率变更分析(supershift-EMSA)和染色质免疫沉淀(ChIP)分别在体外和细胞内筛选、鉴定等位基因特异性结合的转录因子；3)通过生物信息学预测调控CARM1的靶miRNA;利用real-time PCR检测其在冠心病病例和对照中的表达；通过共转染野生型或种子区突变的CARM13’-UTR区报告基因及靶miRNA模拟物(mimics)证明该miRNA结合CARM13’-UTR种子区；在细胞水平上过表达或敲减该miRNA,通过real-time PCR和Western blot检测CARM1的mRNA和蛋白水平,明确其对CARM1表达的调控；4)通过CARM1的功能性多态位点与血浆同型半胱氨酸(homocysteine, Hey)水平的关联研究,及细胞中过表达人源CARM1后ELISA检测细胞上清及胞内Hcy的水平,探索CARM1对Hcy的调控作用；5)在1010例冠心病病例和3998例对照中进行CARM1的功能性位点与冠心病的关联研究,使用加性模型分析少见等位基因对冠心病发生的效应。结果：1)与对照组相比,急性冠脉综合征(ACS)组PBMCs中CARM1的mRNA水平升高3.9倍,蛋白水平升高1.5倍；2)根据LD分析和ENCODE证据,筛选出4个潜在功能性SNP；在健康人群中3个SNP位点与CARM1的表达水平相关,即rsl2460421(A/G)、rsl17569851(T/C)和rs4804544(A/G),其中后两个位点完全连锁；报告基因实验结果表明,rsl2460421-rsl17569851单体型GC和单体型AT的转录活性分别是单体型GT的2.0倍和1.7倍；EMSA结果显示rs12460421的A等位基因与核蛋白的结合能力强于G,rsl17569851的C等位基因与核蛋白的结合能力强于T;MC-EMSA筛选出转录因子Egr-1与这两个位点结合；supershift-EMSA和ChIP实验分别在体外和细胞内水平证明Egr-1结合这两个位点且不同等位基因与Egr-1的亲和力不同；3)生物信息学预测与CARM1结合的靶miRNA为miR-15a和miR-16；与对照组相比,ACS病例组的PBMCs中1miR-15a的表达水平降低37%,而miR-16则表达升高；野生型和突变型CARM13’-UTR的报告基因与miR-15a mimic共转染细胞后,双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-15a与CARM13’-UTR的两个种子区都发生结合；在293T细胞中过表达miR-15a不引起CARM1下调,但敲减]miR-15a后CARM1表达增加；4)在健康人群中,CARM1的功能性多态位点rs117569851与血浆Hcy水平存在关联(P=0.02),每增加一个少见等位基因T,Hcy的水平降低2.16μmol/L;5)rsl17569851与冠心病的关联研究未检出统计学差异(校正年龄、性别、BMI后P=-0.053)。结论：1)ACS患者PBMCs中CARM1基因的1mRNA和蛋白水平表达水平升高,提示该基因在冠心病的发生中可能起重要作用；2) CARM1启动子区功能性多态位点rs117569851的少见等位基因T通过降低与转录因子Egr-1的结合,下调CARM1的表达,降低血浆Hcy水平,从而可能潜在减少冠心病的发病风险；3) miR-15a在ACS患者PBMCs中表达下降,减轻了对CARM1mRNA的降解和蛋白翻译的抑制作用,从而使CARM1的表达水平升高；4)关联研究表明CARM1的功能性多态rs117569851通过调控Hcy代谢,可能参与冠心病的发生。目的：GWAS表明位于脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase, LPL)3’-UTR的多态位点rs1059611与血脂水平关联,但其是否具有生物学功能尚不清楚。本研究初步探索该位点对转录活性及转录因子亲和力的影响。方法：1)在pGL-3promoter载体的报告基因下游插入含有rs1059611(C/T)位点的基因组序列,构建重组质粒；利用双荧光素酶报告基因系统,检测该位点对转录活性的影响；2)提取人内脏脂肪组织核蛋白,与含有rs1059611(C/T)位点的探针孵育后进行电泳迁移率变更实验(EMSA),比较两个等位基因与核蛋白结合形成的迁移带的差异；分别用C等位基因和T等位基因的冷竞争探针与核蛋白预孵育,再加入生物素标记的探针进行冷竞争EMSA实验,观察迁移带是否消失。结果：1)含有rs1059611位点的序列能够增强转录活性,常见等位基因T转换为少见等位基因C后转录活性显著增高(0.69vs1.00)；2)rs1059611的T等位基因探针与脂肪组织核蛋白结合形成的迁移带在灰度上高于C等位基因;个体A的脂肪组织核蛋白与等位基因结合的差异比个体B更显著;200倍冷竞争探针预孵育使迁移带完全消失。结论：rs1059611的常见等位基因T转换为少见等位基因C后转录活性增高;rs1059611的常见等位基因T结合转录因子的亲和力大于少见等位基因C。说明rs1059611具有影响转录活性的生物学功能。