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兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)和彭泽鲫(Carassius auratus var.pengzesis)是我国重要的淡水经济鱼类,利用兴国红鲤的精子诱导彭泽鲫雌核发育可得到异源三倍体彭泽鲫和极少量的异源四倍体彭泽鲫。为了进一步研究异源四倍体彭泽鲫与母本彭泽鲫的差异,本研究以彭泽鲫为对照对异源四倍体彭泽鲫的繁殖性能、胚胎发育、生长相关基因的表达进行了研究,并且开发了一对可快速鉴别两种鱼的分子标记。主要研究结果如下:1.三倍体和异源四倍体彭泽鲫的繁殖能力及胚胎发育研究使用兴国红鲤的精子诱导异源四倍体彭泽鲫与彭泽鲫雌核发育均获得较高的受精率、孵化率、出苗率。通过统计分析发现,异源四倍体彭泽鲫的受精率、孵化率、畸形率、出苗率均显著高于彭泽鲫。对异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫的胚胎发育受精卵和胚胎进行了观察,结果发现:两种鱼的受精卵呈圆形或者椭圆形,浅黄色,卵质均匀分布,属于粘性沉性卵。胚胎发育过程及每个时期的特征基本一致,均经历了受精、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官分化、和出膜7个阶段,一共26个时期。在水温24±1℃下,异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫的受精卵平均孵化时间分别为57h11 min和66h 29 min;通过统计分析发现,异源四倍体彭泽鲫的受精卵卵径(1.73±0.01 mm)显著大于彭泽鲫(1.66±0.017 mm);异源四倍体彭泽鲫的初孵仔鱼长度(5.18±0.17 mm)显著大于彭泽鲫(4.78±0.07 mm),异源四倍体彭泽鲫胚胎的总发育积温(1372.6 h·℃)低于彭泽鲫胚胎的发育积温(1595.6 h·℃);以上结果表明,异精刺激下两种鱼均有正常的繁殖能力,且异源四倍体彭泽鲫繁殖性能优于彭泽鲫,其次异源四倍体彭泽鲫的胚胎能够正常发育,发育的时间少于母本彭泽鲫,发育所需的积温低于母本彭泽鲫。2.三倍体和异源四倍体彭泽鲫GH/IGF轴基因的表达研究对12月龄的异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫的体长和体重进行测量,结果显示:异源四倍体彭泽鲫的体长(141.43±7.27 mm)和体重(88.6±13.6 g)均显著大于彭泽鲫的体长(129.34±8.03 mm)和体重(61.53±12.6 g),说明前12月龄异源四倍体彭泽鲫鱼生长速度比彭泽鲫快;基于异育银鲫、彭泽鲫、金鱼的GH、IGF-1、IGF-2的cDNA序列,使用RT-PCR克隆了异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫的IGF-2、IGF-1、GH的cDNA序列,结果显示:异源四倍体彭泽GH、IGF-1、IGF-2基因的c CDNA序列长度分别为992 bp、685、782 bp,彭泽鲫GH、IGF-1、IGF-2基因的c CDN序列长度分别为993 bp、644 bp、780 bp;两种鱼GH、IGF-1、IGF-2基因的开放阅读框均一致,分别为633 bp、486 bp、605 bp;用BLAST软件对异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫GH、IGF-1、IGF-2与其他物种进行同源分析,结果表明:GH基因的氨基酸序列与鲫GH基因氨基酸序列同源性为99.52%,异育银鲫为99.05%,鲤为96.19%;IGF-1基因的氨基酸序列与鲫同源性为100%,鲤为96.27%;IGF-2基因的氨基酸序列与鲫同源性为99.5%,鲤为90.55%。两种鱼的GH、IGF-1、IGF-2基因与鲫属和鲤属的鱼类均具有高度的同源性,说明三个基因具有高度的保守性。使用荧光定量PCR技术检测GH、IGF-1、IGF-2在异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫垂体、脑、肌肉、肝脏组织中的表达情况,结果显示:GH、IGF-1、IGF-2基因在异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫检测的四个组织中均有表达,其中GH在垂体中表达量最高,在其他组织中表达较低,各个组织的具体表达量从高到低的排序为:垂体>脑>肝脏>肌肉;IGF-1主要在肝脏中表达量最高,其他组织的表达量较低,各个组织的表达量从高到低的排序为:肝脏>肌肉>脑>垂体;IGF-2主要在肝脏中表达,在各个组织的表达量从高到低的排序为:肝脏>肌肉>垂体>脑。通过统计分析发现,异源四倍体彭泽鲫垂体中GH的表达量显著高于彭泽鲫,在肝脏组织、肌肉组织、脑组织中GH的表达量没有显著差异;异源四倍体彭泽鲫肝脏组中IGF-1的在表达量显著高于彭泽鲫,异源四倍体彭泽鲫肌肉组织中IGF-1的表达量显著高于彭泽鲫,在垂体组织和脑组织中IGF-1的表达量没有显著差异;异源四倍体彭泽鲫肝脏组织和脑组织中IGF-2的的表达量显著高彭泽鲫,在肌肉和垂体组织中IGF-2的表达量没有显著差异。这些结果表明,异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫的垂体是GH的合成场所,肝脏是IGF-1和IGF-2的合成场所,此外异源四倍体彭泽鲫的快速的生长可能与GH、IGF-1、IGF-2的高表达有关。3.鉴别三倍体和异源四倍体彭泽鲫的分子标记开发利用NCBI上鲤和鲫的基因组数据,通过比对两个基因组中的基因序列,获得15个鲤的特异性片段,设计15对引物,筛选后获得2对可用的引物,在此基础上设置五个温度梯度对引物的退火温度进行优化,最后获得了1个稳定的DNA分子标记,该标记在24尾兴国红鲤和异源四倍体彭泽鲫中均能够扩增出1000 bp的单一条带,而在24尾彭泽鲫中均无法扩增出该条带,鉴定成功率达100%,这些结果说明了该DNA分子标记鉴别异源四倍体彭泽鲫和彭泽鲫具有很强的特异性。