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小尾寒羊是我国重要濒危物种之一，构建小尾寒羊的cDNA文库对于小尾寒羊遗传资源的保护具有重要意义。本研究运用SMARTTM技术成功地构建了小尾寒羊的cDNA文库。以小尾寒羊耳缘组织为试验材料，用GENMED试剂盒提取总RNA，核酸蛋白检测仪测其OD260/280值为1.98，甲醛变性电泳后出现两条带：28S和18S，其亮度约比为2:1。以提取的RNA作为模板，用LD-PCR法扩增cDNA的第二条链，琼脂糖电泳检测显示一条弥散的带，大小在4Kb以下，用Sfi内切酶切割ds-cDNA后，回收酶切的大片段，将其与λ噬菌体连接，然后用包装蛋白进行包装、再扩增，即得到小尾寒羊cDNA文库。检测小尾寒羊cDNA文库的容量、重组率以及插入片段长度。所构建的cDNA文库扩增后文库的滴度为1.5×1010pfu/mL，重组率为95.83％，插入片段平均大小为910bp。
运用PCR扩增法，从小尾寒羊cDNA文库中筛选了核糖体蛋白基因RPL23A，测序结果与Genbank进行比对，相似度达到96％。本试验采用了双酶切法成功地构建了RPL23A基因的真核表达载体pEGFP-N3-RPL23A和原核表达载体pGEX--4T-1-RPL23A。SDS-PAGE和Westernblot检测pGEX-4T-1-RPL23A融合蛋白的表达情况，结果显示，在42kD左右的位置出现RPL23A融合蛋白的表达带，表明RPL23A基因在BL21菌中表达成功。
试验中采用贴壁法培养了乌珠穆沁羊成纤维细胞，利用脂质体2000介导法将pEGFP-N3-RPL23A导入体外培养的乌珠穆沁羊成纤维细胞中。共聚焦显微镜观察RPL23A基因在细胞中的表达情况，结果发现，在转染后24、48和72h，绿色融合蛋白在乌珠穆沁羊成纤维细胞的细胞核与细胞质均有分布。转染后24h荧光在细胞中分布均匀，48h后细胞核中表达强于细胞质并达到峰值，72h后荧光强度逐渐衰弱，细胞逐渐凋亡。重组融合蛋白的转染率在9.7％～22.8％之间。
综上所述，本试验成功构建了小尾寒羊cDNA文库，从中筛选出PRL23A基因，并对PRL23A基因的表达进行了初步研究。此项工作的开展不仅对羊基因结构与功能研究具有重要意义，而且为寻找新基因提供了一种有效的途径，也为今后的研究工作打下了一定的基础。