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目的:研究五肽胃泌素后处理对人胃黏膜E皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并初步探讨其机制。
方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞系(GES-1),建立缺氧/复氧损伤模型。实验时细胞随机分为五组:常氧对照组(N)、缺氧/复氧组(H/R)、五肽胃泌素(Pentagastrin)后处理组(PP)、胃泌素受体拮抗剂(Proglumide)+五肽胃泌素后处理组(P+PP)、DMSO溶剂对照组(DM)。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞核的形态学变化,可见光分光光度法测定胞浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)水平,免疫印迹法测定胞浆Bcl-2、Bax的表达。
结果:MTT检测显示,各组细胞存活率分别为100.0%±0%、54.8%±1.6%、73.8%±1.4%、62.0%±2.4%和54.2±%1.0%。五肽胃泌素后处理可以对胃粘膜细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,PP与H/R比较,细胞存活率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。胃泌素受体拮抗剂能够翻转五肽胃泌素后处理的保护效应,P+PP与PP比较,细胞存活率降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,各组细胞凋亡率分别为2.62%±0.46%、14.74%±2.13%、5.28%±1.19%、10.18%±1.40%和13.51%±2.17%。PP与H/R比较,细胞凋亡率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。P+PP与PP比较,细胞凋亡率升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。Hoechst33258荧光染色显示,H/R凋亡阳性细胞增多,PP凋亡细胞减少,P+PP凋亡细胞增多。可见光分光光度法检测显示,各组细胞T-SOD活性分别为31.56%±2.87%,23.36%±1.43%,29.80%±1.59%,24.54%±1.09%和23.16%±1.65%U/mL。MDA水平分别为1.30%±0.54%,3.38%±1.05%,1.41%±0.52%,2.64%±0.37%和3.60%±0.82%nmol/mL。Westernblot检测显示,正常人胃黏膜上皮细胞表达Bcl-2和Bax;H/R与N比较,Bcl-2表达减少,Bax表达增加;PP与H/R比较,Bcl-2表达增加,Bax表达减少;P+PP与PP比较,Bcl-2表达减少,Bax表达增加。
结论:1.缺氧2h/复氧4h模型能够促使GES-1发生凋亡;2.100μmol/L的Pentagastrin后处理能够明显减少缺氧/复氧时的细胞凋亡;3.Pentagastrin具有抗氧化作用;4.胃泌素受体介导了Pentagastrin后处理对GES-1缺氧/复氧损伤的保护作用,可能通过抑制内源性Bax表达的增加且上调Bcl-2的表达,从而抑制了胃粘膜细胞凋亡。