杜仲叶中杜仲胶含量与分子量分布研究

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杜仲(Eucommia ulmoides Olive.)为杜仲科杜仲属的落叶乔木,是中国特有的名贵药材树种,也是世界上适应范围最广的重要胶源植物,广泛分布于我国亚热带到暖温带的广大地区。杜仲自古取皮入药,具有强筋骨、补肝肾、久服轻身耐老等功效,为中药上品。现代药理研究证明,杜仲叶含有和皮基本相同的化学成分,具有相似的药理作用。值得一提的是,杜仲植株的各个组织器官均含杜仲胶,杜仲胶高弹性体所独具的“橡胶—塑料”双重特性和形状记忆等特殊功能,为杜仲的产业化开发提供了十分广阔的前景。本论文以杜仲叶为研究对象,对不同无性系杜仲胶的含量、分子量、分子量分布以及动态变化进行了比较系统的研究,首次运用凝胶色谱法(GPC)分析了不同无性系杜仲胶的分子量与分子量分布:设计了叶面喷施不同种类及浓度的外源激素的试验,研究了外源激素对杜仲胶含量、分子量与分子量分布的影响,首次探讨了外源激素对杜仲胶分子量与分子量分布的影响;对杜仲叶中药用活性成分杜仲醇进行了较系统的研究,确定了杜仲醇的最佳提取条件,建立了杜仲醇含量测定的定量方法。具体结论如下:从杜仲叶中提取得到杜仲胶,并通过红外光谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱验证了其结构,建立了从杜仲叶中提取杜仲胶的“乙醇—甲苯—甲醇”新方法。对不同无性系杜仲胶的含量进行研究,结果显示不同无性系杜仲胶含量存在极显著差异,表明遗传基因对杜仲胶在植物体内的合成起着极其重要的作用。无性系G3杜仲胶含量最高,无性系L41中杜仲胶含量最低。从中选出G3、X18、L11和L49四个杜仲胶含量较高的无性系作为高含胶无性系。首次运用凝胶色谱法(GPC)分析了不同无性系杜仲胶分子量与分子量分布,发现其分布表现出明显的双峰现象,既有高分子量部分,又有低分子量部分。不同无性系杜仲胶高分子量部分、低分子量部分、平均分子量及分子量分布之间均存在极显著差异,表明遗传基因对杜仲胶分子量与分子量分布有很大的影响。平均分子量最大的无性系是L23和L33,较大的无性系包括G1、X11、L41和L0;平均分子量最小的无性系是L49,较小的无性系包括L27、X18、G2和G3。16个无性系均是低分子量部分所占比例较大,约80%~90%,高分子量部分所占比例较小,约10%~20%,说明各无性系杜仲胶分子量体系中主要是分子量1.3×10~4~2.0×10~4的低分子量部分,而分子量37×10~4~86×10~4的高分子量部分很少。首次对杜仲胶的分子量与分子量分布的动态变化进行了研究,结果表明不同采收期杜仲胶含量及分子量与分子量分布均存在极显著差异。从6月到10月各无性系杜仲胶含量总的来说呈逐渐增长趋势,其中从6月到8月增长幅度比较大,分子量的变化趋势则与胶含量的变化趋势相反,从6月到10月,各无性系分子量总的来说随生长发育阶段逐渐减小,分子量分布也逐渐减小,高分子量部分所占比例也逐渐减小。不同外源激素处理对杜仲胶含量的影响的研究表明,四种外源激素(NAg、GA~3.6-BA和2,4-D)均对杜仲胶的合成有一定的促进作用,能使杜杜仲胶含量显著提高。其中GA3效果最好,其次是2,4-D、6-BA。同一种激素不同浓度的处理对提高杜仲胶含量的效果不同,GA3以300ppm为最好,2,4-D以0.1ppm为最好,6-BA以0.5ppm为最好,NAA低浓度的0.01ppm和高浓度的1.0ppm效果相当,中浓度的0.1ppm效果却较差。外源激素不同喷施期对杜仲胶含量的影响不同。7月份喷施,NAA、GA3、6-BA和2,4-D四种激素处理杜仲胶含量均有显著提高,8月份喷施,杜仲胶含量有的提高,有的下降,NAA和GA3处理杜仲胶含量增加了,但增加幅度比7月喷施要小,6-BA和2,4-D处理杜仲胶含量反而下降了;9月及以后喷施,各种处理均不能提高杜仲胶含量,反而使杜仲胶含量降低。表明要提高杜仲胶含量,各种激素的最佳喷施期应该在7月上旬。各种激素处理对杜仲胶的合成的促进作用均有一定的时效性,即喷施后有一个最佳采收期。8月份(即处理后一个月)采样分析,四个处理杜仲胶含量均显著提高;9月以后则不仅不能提高杜仲胶含量,反而使其下降了。表明为提高杜仲胶含量,最佳采收期是喷施后一个月。首次研究了不同外源激素处理对杜仲胶分子量与分子量分布的影响,结果表明,有的处理能使杜仲胶分子量与分子量分布增大,有的处理能使杜仲胶分子量与分子量分布减小。筛选出了能增大或减小杜仲胶分子量与分子量分布的外源激素种类及其浓度。初步探讨了外源激素对杜仲胶分子量与分子量分布的影响趋势,为进一步研究杜仲胶的微观结构及产品开发奠定了基础。从杜仲叶中分离纯化得到杜仲醇,并通过红外光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和质谱鉴定了其结构。应用高效液相色谱法测定了杜仲醇的含量,并建立了杜仲醇含量测定的定量方法:色谱柱:Kromasil ODS柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇:水(10:90);流速:1ml/min;检测波长:210nm;柱温:25℃。通过单因素和正交试验,确定了从杜仲叶中提取杜仲醇的最佳条件:原材料粉碎,加10倍量蒸馏水于80℃水浴,提取2次,每次2h。首次对不同采收期杜仲叶中杜仲醇含量的动态变化进行了研究,发现杜仲醇的含量随叶片采收期的不同存在显著差异,8月~10月含量较高,5、6和11月含量较低,提出以杜仲醇为指标的杜仲叶的最佳采收期是9月中旬。
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