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背景和目的: 背景:食管癌是一种常见的恶性肿瘤,潮汕地区是我国食管癌六大高发区之一,其死亡率一直高居不下。食管癌治疗的基础研究一直是我们孜孜不倦探索的课题。多数研究发现肥大细胞不仅作为免疫效应细胞在炎症反应中扮演着重要角色,还发现肿瘤生长过程与生物机体的癌细胞周围肥大细胞(mast cell, MC)的募集与浸润有关系,如肠癌,胃癌,子宫内膜癌,甲状腺癌等癌组织周围有MC聚集。肥大细胞能调控肿瘤的进展以及血管的生成。又如抗肿瘤药物三氧化二砷(arsenic trioxide, As2O3)对于多种恶性肿瘤细胞(如胃癌、肝癌、神经胶质瘤和子宫内膜癌等)具有诱导凋亡或抑制作用。另有研究表明抗肿瘤药物As2O3还可影响细胞微丝骨架蛋白F-actin的重组。肌动蛋白细胞骨架除了维持细胞形态及结构框架和细胞极性外,与细胞的黏着、延伸和迁移有密切相关。用As2O3干扰肿瘤细胞微丝骨架蛋白,不仅影响细胞周期、细胞形态以及细胞极性还会影响着肿瘤细胞的黏着、延伸和迁移能力。鉴于以往多数研究均在肿瘤细胞培养或有免疫缺陷的生物机体进行,无法实现肿瘤细胞、免疫炎性细胞及抗肿瘤药物As2O3三者之间的复杂关系的研究。因此,本研究利用食管癌 EC109细胞及一系列处理引入小鼠腹腔,建立癌细胞与肥大细胞迁移的动物模型,以此探讨化疗药物 As2O3对癌细胞生长的影响。 目的:建立小鼠肥大细胞迁移的动物模型,探讨生物机体的免疫功能调节及化疗药物对人食管癌EC109细胞株生长的影响。 方法: 利用肥大细胞的特征性蛋白酶抗体和鬼比环肽等免疫荧光及PI标记;以流式细胞术检测并分析小鼠腹腔液中肥大细胞亚型的百分率及肿瘤细胞周期变化和各期细胞内 F-肌动蛋白( fibros actin, F-actin)含量的变化;使用激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒的分布。通过western blotting方法检测小鼠肠组织类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的表达,并通过组织化学方法,观察各种诱导处理后小鼠肠组织肥大细胞由肠道向腹腔移动的变化。 结果: 1.根据流式细胞仪点图分布分析,将小鼠肥大细胞分为:类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阴性( MC T);类糜蛋白酶阳性、类胰蛋白酶阴性( MC C)和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性( MC TC)三种亚型,且T型MC明显多余TC型和C型( P<0.05)。 2.以共聚焦显微镜显示三种亚型的MC均含有丰富的分泌颗粒并分布于细胞膜内侧,为其出芽突起形成储备的状态。 3.经组织切片观察到诱导处理后小鼠肠组织MC由肠道向腹腔移动,且胰酶对MC的诱导作用大于食管癌细胞和As2O3。 4.经诱导迁移入腹腔的MC,迅速升高G0/G1期细胞及降低S期细胞内的F-actin含量,DNA检测结果显示G0/G1期的肿瘤细胞数量迅速增加( p<0.05),S期细胞含量降低;G2/M期细胞数量增加,MC可能与癌细胞周期由S期向G2/M期跨越相关。 5.三氧化二砷作用下,食管癌细胞的G0/G1期细胞数升高,S期下降,能延迟食管癌细胞的G0/G1期,阻碍细胞向S期跨越,且食管癌细胞中F-actin含量降低,尤其是S期。诱导肥大细胞迁移入腹腔的同时,As2O3作用下,食管癌细胞各期的F-actin含量均下降,其G0/G1期细胞数量显著增加。 结论: 1.小鼠肥大细胞分为T型、TC型和C型三种亚型。三种亚型的MC均含有丰富的分泌颗粒并分布于细胞膜内侧。 2.食管癌EC109细胞株及其一系列对比处理移入小鼠腹腔,主要诱导T型MC参与免疫反应。 3.在小鼠腹腔微环境中,免疫功能改变(这里指免疫细胞MC的聚集)迅速升高G0/G1期细胞数量、降低S期细胞的数量,可能通过降低S期F-actin含量来延迟EC109细胞G0/G1期向S期跨越。 4.在小鼠腹腔微环境中,As2O3也可能通过抑制S期EC109细胞内F-actin的重组来延迟细胞从G0/G1期进入S期,从而抑制食管癌细胞的生长。 5.诱导肥大细胞迁入腹腔的同时加入药物As2O3,其作用主要表现为短期效应,促进了肿瘤细胞内F-actin含量的降低,G0/G1期细胞数量较高,出现短暂的延迟G0/G1期向S期跨越,增强了对肿瘤细胞生长的抑制作用。因此,在研究体系为生物机体内,本研究可能更真实地呈现化疗药物对肿瘤细胞的治疗效果。