论文部分内容阅读
哺乳动物卵母细胞成熟以第一次减数分裂双线期为起始,结束于第二次减数分裂的中期。不同于体细胞的均等分裂,卵母细胞减数分裂是一种特殊的不均等分裂。卵母细胞减数分裂不均等的关键在于减数分裂纺锤体在皮层附近的定位。卵母细胞不均等分裂的另一个象征性的特点是“微丝帽”的形成,其中微丝帽呈现为一层厚厚的微丝富集在纺锤体上方的皮层上。由此可见,在雌性哺乳动物不均等分裂的过程中,微丝和微管发挥着不可替代地重要的作用。LIMK1/2作为一种微丝调控因子,通过磷酸化切割蛋白cofilin调控微丝细胞骨架重组,进而参与许多细胞的活动。同时也有研究显示LIMK1/2参与微管解聚。尽管LIMK1/2对微丝和微管有着重要的调控作用,但其在猪卵母细胞减数分裂中的作用,尚不清楚。因此,有必要探索LIMK1/2在猪卵母细胞成熟中的作用,这对于其生物学功能的研究以及卵母细胞成熟机制的完善都有着深远的影响。本试验以猪卵母细胞为研究对象,采用蛋白印迹、免疫荧光染色以及激光共聚焦等方法,研究LIMK1/2在猪卵母细胞减数分裂成熟中的作用。先用免疫荧光染色及蛋白印迹检测LIMK1/2在猪卵母细胞成熟中的定位与表达;再通过特异性的LIMK抑制剂LIMKi 3破坏LIMK1/2蛋白的活性,研究它对猪卵母细胞减数分裂过程中微丝的组装与分配以及纺锤体定位的影响,最终了解LIMK1/2对猪卵母细胞减数分裂极体排出的调控作用。研究结果如下:(1)免疫荧光染色发现LIMK1/2分布在卵母细胞的皮质并与微丝共定位;(2)LIMKi 3处理后卵丘细胞复合物的扩散减弱并伴随有第一极体排出失败,但这种抑制的效果会随着培养时间的延长而减弱;(3)LIMKi 3处理的卵母细胞经挽救后能排出第一极体,说明LIMKi 3对猪卵母细胞的抑制作用是可逆的;(4)LIMKi 3处理并培养26 h后微丝分配异常,表现为卵母细胞细胞膜和细胞质的微丝的荧光强度减弱;同时大部分LIMKi3处理的卵母细胞纺锤体因迁移失败而定位在远离皮质的区域。这些结果证明,LIMKi 3影响微丝分配以及纺锤体定位,进而抑制第一极体的排出,对猪卵母细胞减数分裂成熟有重要意义。因此,我们可以推断LIMK1/2可能通过调节微丝依赖的纺锤体迁移进而参与猪卵母细胞减数分裂成熟。