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目的：艾滋病即获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immune DeficiencySyndrome，AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)引起的一种严重传染病。大部分HIV感染者感染8-10年后进入艾滋病期，但部分患者在感染HIV后短时间内CD4+T细胞计数快速下降到350 cells/μL以下，引起这种CD4+T细胞快速下降的原因还不是很明确。大量数据表明，HIV不同疾病进展与感染病毒的类型、免疫应答状况、病毒与宿主相互作用中的免疫逃逸、宿主遗传背景以及环境物理和生物因子等有关。白细胞介素1(Interleukin1，IL-1)是最早被发现的细胞因子之一，在细胞间相互作用、免疫调节及炎症反应中起重要作用，其中IL-1家族中针对IL-1β、IL-1Ra及IL-18的中和活性单克隆抗体或重组蛋白已被批准成功应用于多种临床疾病的治疗。白细胞介素33(Interleukin33，IL-33)是白介素家族的最新成员，最初作为一种新型“警报素”被研究。警报素是指病原生物感染及创伤等因素导致细胞损伤或死亡时释放或分泌的一类宿主蛋白，可以募集和激活抗原提呈细胞，启动固有免疫应答和适应性免疫应答。IL-33在内皮和上皮细胞的细胞核内表达，当创伤和感染引起内皮细胞和上皮细胞损伤时，坏死细胞释放的IL-33可以作为警报素，募集和活化具有相应受体的固有免疫细胞，如树突状细胞(DC)、巨噬细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞(NK)和自然杀伤T细胞(NKT)细胞等，使其释放促炎性细胞因子、趋化因子、组胺和前列腺素等炎性介质，引发和促进炎症反应，增强吞噬细胞和杀伤细胞功能。近期多项研究显示，IL-33不仅发挥警报素作用，还可调控免疫应答过程，在机体免疫系统的调节中发挥重要作用。动物实验显示IL-33可以驱动杀伤性T细胞的保护性免疫反应，加强肠道内调节性T细胞(Regulatory T cells，Tregs)的功能。IL-33是否在HIV感染发挥作用及机制尚不清楚。目前对于HIV感染者IL-33表达的研究结果并不一致，有研究发现HIV感染者血清中IL-33表达比健康对照显著降低，有的研究则发现无变化，但是对于IL-33的可溶性受体sST2的表达研究较统一，HIV感染后显著升高。HIV的感染可以导致CD4+T的减少和CD4+T、CD8+T细胞比例的失衡，IL-33及受体ST2是否在HIV感染中发挥作用，并影响CD4+T、CD8+T细胞的功能从而调节HIV感染免疫应答目前尚不明确。 方法：44例无症状HIV感染者和20例HIV阴性的健康对照者的血浆标本，以及HIV感染者和正常人的细胞均来自中国医科大学附属第一医院艾滋病研究所，感染者感染途径多为男男性接触。感染者的检测时间点均为感染后120天，未接受高效抗逆转录治疗（Highly active anti-retroviral therapy，HAART）治疗，并且排除肝炎、肿瘤性疾病、自身免疫性疾病等。20例健康对照为随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人(Normal controls，NCs)。实验方法包括:1、T淋巴细胞绝对值计数将20μL CD4/CD8/CD3 TriTEST试剂分别加入绝对计数管中，用逆向加样法加入50μL抗凝血，室温避光15分钟，加入免洗溶血素450μL，室温，避光15分钟。用FACSCalibur流式细胞仪上样并用MultiSET软件检测进行自动分析，计算CD4+T、CD8+T、CD3+T细胞绝对值及相应比值。2、HIV病毒载量测定采用Roche公司The COBAS(@) AmpliPrep(@)/COBAS(@)TaqMan(@)HIV-1 Test，v2.0试剂盒在COBAS(@)TaqMan(@)系统进行全自动PCR反应体系制备及病毒载量检测。检测下限为1 copy/mL。3、ELISA测定血浆中IL-33和sST2的含量Human IL-33 ELISA Kit和Human ST2/IL-1 R4 QuantikineELISA Kit:取出反应板，每孔中加入反应稀释液;分别加入标准品和待测血浆，封膜，按要求水平微板震荡仪上2小时（500 rpm±50 rpm）或;弃去反应液并用配置好的洗液洗4遍，吸水纸上拍干;每孔加入耦合液封膜，按要求水平微板震荡仪上2小时（500 rpm±50 rpm）;弃去反应液并用配置好的洗液洗4遍，吸水纸上拍干;每孔中加入配置好的显色剂，桌面上室温避光孵育30分钟;每孔中加入终止液，轻轻震荡混匀;30分钟内上酶标仪（单波长450nm），得出OD值，绘制标准品的标准曲线并计算待测血浆中的IL-33及sST2浓度。4、密度梯度离心提取外周血单个核细胞抽取HIV-1感染者的外周血，将新鲜外周血与磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer saline，PBS)按照1∶1的比例充分混匀，将混合液缓慢匀速地加入到与全血等量的淋巴细胞分离液液面上，并进行密度梯度离心。密度梯度离心后，小心吸取白膜层。5、细胞分选提取HIV感染者的新鲜外周血PBMCs，用Stem Cell公司的CD4+T、CD8+T细胞富集试剂盒阴性选择目的细胞;使用流式分选仪FACS Aria进行CD3+T细胞分选。6、IL-33对CD4+T、CD8+T细胞IFN-γ分泌影响分选的CD4+T、CD8+T细胞用96孔U底板接种，每孔用完全1640（即含谷氨酰胺的1640内加入10％FBS和1％青链霉素）培养细胞，200μl体系中含2*106个细胞，分别用anti-CD3/anti-CD28(5μg/mL，BDBiosciences)、gag pool(2μg/mL)或CD8+T细胞特异性的CEF肽段库(0.03μg/mL，Miltenyi Biotec，Germany)刺激细胞。同时分别设置重组IL-33（R&D公司）浓度梯度:0、100pg/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL，于37℃、5％CO2培养箱共培养3天。用LSRⅡ检测CD4+T、CD8+T细胞IFN-γ的分泌情况，用Flowjo7.6软件进行流式数据的分析。7、抗-ST2抗体对IL-33的阻断实验分选的CD3+T细胞中分别加入或不加入1 ng/mL的rhIL-33、0.2μg/mL、2μg/mL、20μg/mL的抗-ST2抗体(Human ST2/IL-33R Antibody)或20μg/mL的同型对照Normal GoatIgG Control，于37℃、5％CO2培养箱共培养3天。用LSRⅡ检测CD4+T和CD8+T细胞IFN-γ的分泌情况，用FlowJo7.6软件进行流式数据的分析。8、应用SPSS17.0软件包进行统计分析，用Graphpad5.0进行绘图。各组间实验指标的比较采用方差分析，相关性分析采用Spearman秩相关检验，差异性检验采用T检验，P＜0.05为有统计学意义。 结果：⑴IL-33的ELISA检测结果显示，HIV急性期患者血浆中IL-33水平比健康对照升高(p=0.003)，CD4＜400cells/μL时IL-33的表达比CD4≥700cells/μL时显著升高(p=0.046)，VL≥4.5 copies/mL时IL-33的表达比VL＜3.5 copies/mL时显著升高(p=0.039)，即HIV急性期患者IL-33的表达与疾病进展呈正相关。⑵重组人IL-33与gag pool共培养促进HIV患者CD8+T细胞分泌IFN-γ实验结果显示，患者CD8+T细胞在HIV特异性的刺激(gag pool)下加入不同浓度的重组人IL-33组均比不加组IFN-γ分泌升高或有升高的趋势:100pg/mL(p=0.099)、1ng/mL(p=0.021)、10ng/mL(p=0.007)、100ng/mL(p=0.006)。而我们在CD8+T细胞中加入HIV非特异性刺激物CEF，并加入不同浓度的重组人IL-33，实验结果显示加入重组人IL-33组也均比不加组IFN-γ分泌升高或有升高的趋势:100pg/mL(p=0.008)、1ng/mL(p=0.007)、10ng/mL(p=0.063)、100ng/mL(p=0.006)。我们进一步发现了重组人IL-33与gag pool共培养可以促进HIV患者CD4+T细胞分泌IFN-γ:100pg/mL(p=0.020)、1ng/mL(p=0.012)、10ng/mL(p=0.071)、100ng/mL(p=0.120)。⑶sST2的ELISA检测结果显示，HIV患者血浆中sST2水平比健康对照升高(p=0.005)，且sST2与CD8的数量呈负相关（r=-0.330，P=0.031）。⑷在体外实验中加入不同浓度抗-ST2抗体后发现抗-ST2抗体可以抑制IL-33对CD4+T细胞的促进功能:0.2μg/mL(p=0.016)、2μg/mL(p=0.001)、20μg/mL(P=0.0005);同时也抑制IL-33对CD8+T细胞的促进功能:2μg/mL(P=0.003)、20μg/mL(P＜0.0001)。 结论：HIV感染急性期患者血浆中IL-33和sST2表达均升高，IL-33与HIV疾病进展呈正相关，但是功能上可以促进CD4+T、CD8+T细胞分泌IFN-γ;而同时升高的sST2作为诱骗受体可以抑制IL-33的功能，影响HIV疾病进展。