第一部分：恶性脑胶质瘤亚临床肿瘤分割照射方案优化的实验研究目的：比较不同分割照射方案照射后恶性脑胶质瘤亚临床肿瘤的成瘤率差别及肿瘤生长情况,筛选合理适用的恶性脑胶质瘤亚临床肿瘤分割照射的优化方案,为临床更好地开展脑胶质瘤术后放疗提供实测实验依据。材料与方法：采用人脑胶质母细胞瘤裸小鼠亚临床肿瘤为实验模型进行不同分割方案照射(常规分割照射方案2Gy/d×5/w;非常规分割照射方案：1.6Gy×2/dx5/w、4Gy×3/w、3Gy/d×5/w,总剂量分别为40Gy和60Gy)及靶向药泰欣生(0.5mg/只/周,共7周)联合放射线照射(常规分割,总剂量60Gy)。观察指标：1)照射疗程结束时肿瘤形成率,2)肿瘤平均复发时间,3)最终成瘤率(18-24周实验结束时)。结果：(1)在接种细胞数为2.2×105,空白对照组成瘤率为87.5%(7/8)的情况下,总剂量40Gy时,照射结束时常规分割组(第5周)、1.6Gy×2/d×5/w组(第4周)及4Gy×3/w组(第4周)的成瘤率分别为75%、25%和0,肿瘤复发时间分别为96天、109天和102天,至观察结束时(第18周)三组的肿瘤成瘤率分别为100%、100%和100%,无论何种分割方案40Gy的照射总剂量均未能有效控制亚临床肿瘤的不断生长；(2)在接种细胞数为3.1×105空白对照组成瘤率为100%情况下,总剂量60Gy照射结束时常规分割组(第7周)、1.6Gy×2/d×5/w组(第5周)、4Gy×3/w组(第6周)及3Gy×5/w组(第5周)的成瘤率分别为100%、0、0和0,肿瘤复发时间分别为103天、131天、110天和124天,至观察结束时(第24周)各组成瘤率分别为100%、75%、100%和100%;(3)泰欣生单纯给药组(0.5mg/只/周和1mg/只/周)、单纯照射组(常规分割照射,总剂量60Gy)及放化联合组照射结束时各组的成瘤率分别为100%、100%、100%和75%,肿瘤平均复发时间分别为：31天、46天、103天和97天。至观察结束时(第24周)各组成瘤率均为100%。结论：(1)对近期疗效而言,在空白对照组成瘤率为87.5%的条件下,40Gy的照射总剂量即可取得一定亚临床肿瘤的近期控制率,其中大分割组(4Gy×3/w)最好,但远期疗效均不理想。实验结果显示,至观察结束时(第18周)各实验组的成瘤率均为100%,表明40Gy的总剂量只能延缓肿瘤复发的时间,但未取得治愈的效果,因此对肿瘤生长控制而言,40Gy总剂量是不够的。(2)将总照射剂量提高到60Gy,脑胶质瘤的远期控制有一定提高。1.6Gy×2/d×5/w组的远期控制率为25%。(3)在总照射剂量相同情况下,靶向药泰欣生联合常规分割放射线照射的近期疗效好于单纯给药和单纯常规分割放射治疗[疗程结束时(第7周)成瘤率分别为75%、100%和100%],差于非常规单纯放疗组(各非常规分割照射组60Gy疗程结束时的成瘤率均为0)。表明泰欣生联合常规分割放射治疗脑胶质瘤效果不佳,可能与EGFR表达阴性有关。第二部分：干细胞标记技术测定体外培养脑胶质母细胞瘤(BT325)细胞系干细胞数的初步研究目的：通过与经典干细胞识别方法——细胞克隆形成分析法结果的比较,探讨用现代分子生物学干细胞标记技术测定脑胶质瘤细胞群中干细胞数量的可行性。材料和方法：实验采用指数生长期的人脑胶质母细胞瘤BT325细胞系(北京神经外科研究所建立),用经典单细胞克隆形成分析法测定细胞克隆形成率；用现代分子生物学干细胞标记技术(流式细胞术和免疫组化法)测定BT325细胞中干细胞标记物(CD133)阳性细胞标记率及裸小鼠移植瘤组织中干细胞标记物(CD133、Nestin)的表达并对经典和现代干细胞鉴别技术的测定结果进行分析和比较。结果：实验结果显示：(1)当反应体系中CD133抗体含量分别为0.45μg/100μl、0.9μg/100μl、1.8μg/200μl时人脑胶质母细胞瘤BT325细胞系CD133阳性细胞比例分别为0.62%、2.55%、0.067%,PBS组为0.1%、0.1%、和0%,PE组为0.95%、0.3%和0.1%,各组间差异无显著性(P=0.311和P=0.473)；(2)免疫组化的分析结果显示BT325裸小鼠移植瘤组织中未见CD133表达,少许细胞nestin表达阳性；(3)与干细胞分子标志物测定同步进行的单细胞克隆形成分析法的测定结果显示体外培养的人脑胶质母细胞瘤细胞(BT325)的克隆形成率为39.25%±11.35。结论：同步进行分子标志物表达测定和单细胞克隆形成分析实验结果表明(1)人脑胶质母细胞瘤BT325细胞系干细胞标志物CD133表达阴性,少数细胞呈Nestin阳性;(2)与经典的细胞克隆形成分析法相比,现代干细胞鉴别技术未能有效识别具有细胞克隆形成活性的脑胶质瘤肿瘤干细胞。