近几年，越来越多的打结蛋白被发现，但是究竟这类蛋白石如何打结的仍然不清楚。通常情况下多肽链能够自己打结被认为不可能，因此这类蛋白的出现带来了一类新的蛋白折叠问题。YibK和YbeA蛋白都是一类甲基转移酶，这个家族的蛋白在它的多肽链上都含有一个三叶结的打结结构。同时YibK和YbeA的打结结构相对一些复杂的打结结构来说比较简单，同时它们的分子量适中，是比较理想的研究对象。我们对蛋白做了一系列的表征，通过荧光和CD对其化学稳定性做了检测，并且通过CD探讨了其热稳定性情况，与此同时，我们对蛋白做了荧光标记，选择荧光染料AF488和AF647将其标记在蛋白的半胱氨酸上，构建能量转移体系，对其做了单分子的检测。PGK（磷酸甘油酸激酶，Phosphoglycerate kinase）是糖酵解的关键酶，也是每种生物得以生存的必须酶，该酶的缺乏可引起生物体代谢等功能的紊乱。它主要由两个球形的结构阈构成，在与底物结合的过程中发生显著的构象改变，最终发生催化效应。PGK结构、折叠与功能的研究对揭示蛋白质的折叠机理以及PGK蛋白的作用机制有着重要的意义。在本课题中，我们建立了PGK在大肠杆菌中高效表达的方法，并通过纯化得到了纯度和产率较高的PGK。然后对得到的PGK进行了一系列的表征，包括：（1）用圆二色光谱仪对PGK的二级结构进行了分析，结果表明其二级结构为典型的α螺旋，这和报道中的结果相一致；（2）在圆二色光谱仪上分别测定了存在Al3+和不存在Al3+情况下的PGK的热变性曲线；（3）我们用荧光染料AF488和AF647对蛋白进行了荧光标记并且通过单分子检测对其折叠过程进行了研究。