三种栎树叶部病害的相关微生物分离鉴定

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栎树在中国分布广泛,适应性强,其木材用途广泛,具有较高的应用价值和观赏价值。本研究主要调查栎树叶部病害种类,选择在6-9月病害高发期,尽可能选取栎林分布集中且较为原始的地方进行调查采样,在实验室内采用组织块分离方法和稀释涂布法对样品进行微生物分离鉴定。在栓皮栎(Quercus variabilis)叶部病害调查中,对我国四省(河南、陕西、安徽、贵州)的8个地点的栓皮栎叶部病害进行了调查,分离并初步鉴定真菌93株,分属于30个属48个种,分离鉴定细菌32株,隶属于18个属27个种。本研究发现了栓皮栎叶部的6种常见病害,包括炭疽病、赤斑病、褐斑病、穿孔病、黄斑病及白粉病,明确了炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioide),椿启介菌属干孢盾壳椿启介菌(Tubakia dryina)和白粉寄生菌(Ampelomyces quisqualis)分别为炭疽病,褐斑病和白粉病的病原菌。在蒙古栎(Quercus mongolica)叶部病害调查中,主要对我国内蒙古自治区赤峰市宁城县蒙古栎叶部病害进行了调查,分离并初步鉴定真菌27株,分属于10个属10个种,分离鉴定细菌30株,隶属于11个属17个种。本研究明确了蒙古栎叶部4种常见病害,包括黄斑病、穿孔病、白粉病及褐斑病,明确Erysiphe euonymicola是蒙古栎白粉病病原菌。并且分离得到的菌株Bleaf8T为潜在新种,与Mucilaginibacter daejeonensis相似度为96.7%,并对其进行了多相分类鉴定。在托盘青冈(Cyclobalanopsis patelliformis)叶部病害调查中,对我国海南省霸王岭国家森林公园托盘青冈叶部病害进行了调查,分离并初步鉴定真菌4株,分属于4个属4个种,分离鉴定细菌2株,其中TPQG1-4T是寡养单胞菌属的一株潜在新种,对其进行了多相分类鉴定。本研究发现了托盘青冈叶部3种常见病害,包括黑斑病、褐斑病和穿孔病。本研究在丰富林业微生物资源的同时,也为今后的诊断防治危害较为严重的病害提供知识储备。分类研究结果如下:(1)Mucilaginibacter quercina sp.nov.描述菌株Bleaf8T在无氧条件下不能生长,是一株淡粉色杆状革兰氏阴性细菌,宽0.3-0.8μm,长1.1-1.8μm。Bleaf8T对温度的耐受范围为20-37℃,酸碱度的耐受范围适中(p H6.0-8.0),盐的耐受浓度范围为0-3%。过氧化氢酶反应为阳性,氧化酶反应为阳性。细胞内主要脂肪酸(>10.0%)为iso-C15:0(36.9%),综合特征3(C16:1ω7c和/或C16:1ω6c;35.3%)。基因组DNA G+C含量为43.9%。其16S r RNA基因序列与Mucilaginibacter daejeonensis Jip10T相似度最高,为96.7%。菌株Bleaf8T是Mucilaginibacter属的一株新种,模式菌株为从蒙古栎(Q.mongolica)树叶病斑分离的Bleaf8T(CFCC 16165T)。(2)Stenotrophomonas cyclobalanopsidis sp.nov.描述菌株TPQG1-4T是一株兼性厌氧运动型的革兰氏阴性细菌,细胞平均大小为0.5-1.0×2.5-3.0μm。在30℃培养48小时后,菌落呈圆形,凸缘全缘,直径1-2 mm。菌株生长的温度范围为4-37℃(最适30℃),适宜生长的p H值为4.0-10.0(最适7.0),Na Cl耐受范围为0-3%。过氧化氢酶反应为阳性,氧化酶反应为阳性。不能还原氮。其16S r RNA基因序列与Stenotrophomonas lactitubi M15T的序列相似度最高(99.6%),且两者之间的平均核苷酸一致性值(Average nucleotide identity values,ANI)为87.2%。该菌的DNA G+C%含量为67.1%。其主要的脂肪酸是iso-C15:0(25.4%)和anteiso-C15:0(17.0%)。该种的极性脂成分包括磷脂,双磷脂酰甘油,磷脂酰乙醇胺,磷脂酰甘油,氨基磷脂。TPQG1-4T是寡养单胞菌属属的新种,模式菌株为分离自托盘青冈树叶组织的TPQG1-4T(CFCC 15341T=LMG 31208T)。
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