特定增强子序列对人乳铁蛋白基因在山羊乳腺上皮细胞中表达的影响

来源 :扬州大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:violence211
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究通过比较不同调控元件构建的乳腺特异性表达载体在山羊乳腺上皮细胞中的表达情况,特定增强子序列与乳蛋白启动子共同激活人乳铁蛋白cDNA在培养的山羊乳腺上皮细胞中表达,为研制乳腺特异性高效表达载体提供依据,为制备高表达转基因克隆动物乳腺生物反应器提供具有表达潜能的体(供核)细胞。 本实验所用乳腺特异性表达载体为实验室已有的乳腺特异性表达载体BLC-14与BnF95。两载体的区别只是BLC-14除了乳蛋白调控序列外还含有增强子序列。 用胶原酶消化法从泌乳奶山羊的乳腺实质组织中分离得到乳腺上皮细胞,用DMEM/F<,12>培养液培养乳腺上皮细胞。体外培养20代以上仍保持正常细胞繁殖扩增能力,生长良好。 乳腺特异性表达载体BLC-14与BnF95通过电转染法分别导入奶山羊乳腺上皮细胞中,共转染5个细胞系,经含400ug/mLG418的筛选培养液筛选三周后,得到有抗性的阳性克隆细胞株,其中乳腺特异性表达载体BLC.14转染后共获得82株阳性克隆细胞株,乳腺特异性表达载体BnF95转染后共获得73株阳性克隆细胞株。 挑取单克隆细胞株并进行扩大培养。各随机提取3株细胞DNA进行PCR检测,6株细胞PCR检测结果均为阳性。证明获得的抗性培养细胞系接近100%为转基因细胞系。阳性的细胞株进行诱导表达,经间接ELISA检测细胞诱导液,乳腺特异性表达载体BLC-14转染后有9株细胞能稳定表达人乳铁蛋白,而乳腺特异性表达载体BnF95转染后有7株细胞能稳定表达人乳铁蛋白。 结果表明,乳腺特异性表达载体BLC-14与BnF95都能在奶山羊乳腺上皮细胞中表达,但两者在表达水平上存在显著差异(P<0.05)。表明特定增强子序列对外源基因在奶山羊乳腺上皮细胞中的表达具有增强作用。
其他文献
近年来,禽类免疫抑制病在我国养禽业中迅速蔓延,严重地威胁着养禽业的健康发展,禽类免疫抑制病在临床上主要依靠疫苗和药物来防控和治疗;但其中一些疫病迄今为止仍无有效的疫苗和
口蹄疫(Food-and-Mouth disease,FMD)是世界性重大动物疫病之一,被世界动物卫生组织和我国政府列为A类和一类传染病之首。为了给FMD的防控提供更安全、高效的防控产品,本研究通过
英国女作家多丽丝·莱辛(Doris Lessing)被誉为“英国文坛常青树”,一生创作丰富,涉及众多领域,于2007年获得诺贝尔文学奖.其处女作(The Grass is Singing)揭示了十九世纪末
詹姆斯.乔伊斯的《青年艺术家的画像》是西方文学史上第一部用意识流手法创作的小说,其内容主要展现了主人公斯蒂芬从童年到青少年的成长历程。本文从乔伊斯独特的语言特点方
美国南方作家弗兰纳雷.奥康纳在其著名的短篇小说《识时务者为俊杰》中使用了变化多样的文体和各种修辞手法以深化作品的主题。 Flannery O’Connor, a writer in the South
伊丽莎白.毕晓普是二十世纪美国最重要、最有影响力的女诗人之一。美国当代最权威的文学评论家哈罗德.布卢姆和海伦.文德勒高度赞扬她的诗歌艺术,洛厄尔称赞她是“诗人中的诗
英国的著名女诗人克里斯蒂娜.罗赛蒂在她广为传诵的两首挽歌《歌》和《记得》中细腻地抒写了自己对于爱情与死亡的感悟。在她的这两首小诗中,失去了爱情的“我”仿佛被打入冥
本文通过分析《别离辞:节哀》中似是而非的意象,探寻其“奇思妙喻”和“似是而非”的统一,这种与众不同的统一表达出了抽象而深奥的神圣的爱情,给人一种独一无二的美的体验。
乌利茨卡娅的代表作,以外科医生库克茨基家的三个女性--虔诚的仆人瓦萨利亚,新派的女儿塔尼亚,以及挣扎于新旧女性之间的叶莲娜的不同人生建构了关于女性的“多级坐标系”,进
新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒引起的一种急性、高度接触l生禽类传染病,被世界动物卫生组织(OIE)定为A类传染病。新城疫病毒(NDV)属于副黏病毒科、副黏病毒亚科