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目的:1.检测PLCD1对人乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;2.分析PLCD1对ERK/β-catenin/MMP7信号通路的调节作用;3.探讨PLCD1调控ERK/β-catenin/MMP7信号通路的潜在机制。方法:1.使用在线软件Oncomine、Kaplan-Meier Plotter、Bio GRID3.4、bc-Gen Ex Miner,分析PLCD1和KIF3A在人乳腺癌中的表达情况、PLCD1在人乳腺癌中的预后价值,以及PLCD1与KIF3A的相关性;2.运用Real-time PCR检测PLCD1在人乳腺癌组织及配对癌旁组织中的表达情况;采用RT-PCR检测PLCD1在人乳腺癌细胞株中的表达情况;3.运用PLCD1质粒过表达PLCD1;运用si PLCD1和si KIF3A分别敲减PLCD1和KIF3A的表达;运用U0126特异性抑制磷酸化ERK1/2的表达;4.运用划痕愈合实验和Transwell小室实验检测人乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力;5.运用Western blot检测PLCD1、KIF3A、ERK1/2、GSK-3β、β-catenin、MMP7等分子的表达;6.运用IHC检测PLCD1、ERK1/2、β-catenin、MMP7的表达;7.运用ELISA检测MMP7蛋白在细胞培养上清液中的表达情况。结果:1.与癌旁组织相比,PLCD1在人乳腺癌组织中表达相对较低;与乳腺正常组织相比,PLCD1在人乳腺癌组织中的表达较低;与淋巴结转移阴性的乳腺癌相比,PLCD1在淋巴结转移阳性的乳腺癌中表达较低;与低表达PLCD1的乳腺癌患者相比,高表达PLCD1的乳腺癌患者的无远处转移生存期和总生存期较长;2.PLCD1在人正常乳腺组织以及BT-549、SK-BR-3人乳腺癌细胞株中正常表达,在T47D中表达较弱,在MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7以及ZR-75-1细胞株中未见表达;3.在MDA-MB-231细胞中,对照组细胞和PLCD1过表达组细胞24小时迁移的距离分别为28.8±1.0和21.06±1.1(p<0.01),细胞迁移数分别为274±23和113±16(p<0.01),侵袭数分别为137±12和62±10(p<0.01);在MCF-7细胞中,对照组细胞和PLCD1过表达组细胞48小时迁移的距离分别为17.6±0.9和9.55±1.4(p<0.01);在BT-549细胞中,空白对照组、阴性对照组和两个PLCD1敲减组细胞24小时迁移的距离分别为18.8±1.2、17.9±1.5、29.6±2.4和29.6±2.5(p<0.01),细胞迁移数分别为165±9、166±12、323±27和286±31(p<0.01),侵袭数分别为71±4、75±12、123±12和107±20(p<0.01);4.在MDA-MB-231和MCF-7细胞中,与对照组相比,过表达PLCD1的细胞中p ERK1/2、p GSK-3β、active-β-catenin和MMP7的蛋白水平较低,培养上清液中MMP7水平较低;在BT-549细胞中,与对照组相比,敲减内源性PLCD1的细胞中p ERK1/2、p GSK-3β、active-β-catenin和MMP7的蛋白水平较高,培养上清液中MMP7水平较高;在裸鼠成瘤模型中,IHC检测显示过表达PLCD1的瘤体中,p ERK1/2、active-β-catenin和MMP7的表达水平较低;在MDA-MB-231和MCF-7细胞中,特异性抑制p ERK1/2表达,p GSK-3β、active-β-catenin和MMP7的表达较前下降;5.与乳腺正常组织相比,KIF3A在人乳腺癌组织中的表达较高,与PLCD1表达有相关性(r=-0.09,p<0.0001,n=5164);在BT-549细胞中,敲减PLCD1显示KIF3A的表达上调,敲减KIF3A后PLCD1表达未见变化;6.在MDA-MB-231细胞中,空白对照组、阴性对照组和两个KIF3A敲减组细胞24小时迁移的距离分别为31.0±1.2、31.2±1.1、17.9±0.9和17.2±0.5(p<0.01),细胞迁移数分别为167±9、164±9、76±11和95±12(p<0.01),侵袭数分别为125±12、124±9、67±8和88±8(p<0.01);在BT-549细胞中,空白对照组、阴性对照组和两个KIF3A敲减组细胞24小时迁移的距离分别为27.3±1.0、26.9±0.8、8.0±0.9和13.6±1.3(p<0.01),细胞迁移数分别为269±15、260±15、122±16和119±16(p<0.01),侵袭数分别为174±10、173±5、76±6和76±8(p<0.01);7.在MDA-MB-231和BT-549细胞中,敲减KIF3A时,p ERK1/2、p GSK-3β、active-β-catenin和MMP7蛋白水平下降,细胞培养上清液中的MMP7蛋白含量下降;8.同时敲减PLCD1和KIF3A时,划痕愈合实验结果显示BT-549细胞中五组细胞16小时迁移的距离分别为13.6±1.3、13.4±1.0,23.7±0.8、23.6±1.2和17.3±1.2(p<0.01),细胞迁移数分别为153±13、155±7、227±9、230±17和145±13(p<0.01),侵袭数分别为81±7、80±5、163±11、168±12和85±6(p<0.01);9.在BT-549细胞中同时敲减PLCD1和KIF3A时,与单独敲减PLCD1相比,p ERK1/2、p GSK-3β、active-β-catenin和MMP7的表达减弱,细胞培养上清液中MMP7蛋白含量下降。结论:1.PLCD1能够抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力;2.PLCD1通过下调KIF3A调控ERK1/2/β-catenin/MMP7信号通路发挥抑癌基因作用。