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研究背景肝细胞性肝癌(hepatocelular carcinoma,HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,肝细胞性肝癌有原发性肝细胞性肝癌和继发性肝细胞性肝癌之分,原发性肝细胞性肝癌(以下简称肝癌)为我国常见恶性肿瘤之一,高发于东南沿海地区。由于其恶性程度高,手术切除后复发率高,预差。Pokemon基因定位于19p13.3,该区域是一个基因经常发生变异的区域,是人类肿瘤常见失活位点。该基因编码产生的Pokemon蛋白(POK细胞髓样发生因子,亦称为LRF,OCZF和FBI-1)是一种转录抑制因子,可作用于下游的抑癌基因P14ARF导致其功能失活,引起肿瘤发生。Pokemon蛋白是被发现的第一个P14ARF特异性转录抑制剂,并被认为迄今所发现唯一的一个肿瘤总开关,该基因有望成为重要的肿瘤监视靶点。抑癌基因P14ARF近年来引起重视的一个抑癌基因,基因位点定位于9p21,P14ARF能调节细胞周期,主要与癌蛋白MDM2结合,阻止MDM2穿梭于胞核与胞质之间,加速MDM2降解,恢复和稳定细胞内“基因卫士”p53水平,增强p53在G1/S期和G2/S期的限制点作用,使细胞增殖阻滞于G1、G2期,诱导产生p53介导的细胞凋亡,抑制肿瘤的形成。目前,国内外鲜见有关Pokemon基因在肝癌中表达的报道。研究癌基因Pokemon及抑癌基因P14ARF的表达情况与肝癌临床病理特征的关系,将为探讨肝癌的发病机理提供新的思路,并可为肝癌的治疗提供新的靶点。目的通过检测癌基因Pokemon及抑癌基因P14ARF在肝癌中的表达情况,了解其与肝癌临床病理特征的关系,分析原癌基因Pokemon及P14ARF在肝癌发生过程中所起的作用,为临床了解肝癌的生物学行为和指导治疗提供帮助。方法应用RT-PCR法及Western Blotting方法检测40例HCC组织、40例癌旁组织和20例正常肝组织中Pokemon和P14ARF的mRNA及蛋白的表达水平,分析两种基因在三种组织中的表达差异,并探讨其与肝癌临床病理特征的关系。结果1.RT-PCR半定量测定结果:肝癌及肝癌旁组织中的Pokemon的mRNA的表达水平显著高于正常肝组织,两者比较有显著性差异(P＜0.05);肝癌与癌旁组织Pokemon基因mRNA的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05)。Pokemon基因mRNA在肝癌组织中表达水平与病理分级呈显著性相关(P＜0.05),肝癌分化程度越低,Pokemon表达则越强。P14ARF mRNA在正常肝组织、肝癌旁组织中表达显著高于肝癌组织中表达水平,两者有显著性差异(P＜0.05);正常组及癌旁组无显著性差异(P＞0.05)。Pokemon与P14ARF mRNA表达水平与性别、年龄、HbsAg、转移倾向、肝硬变等因素无相关性。2.Western免疫印迹杂交结果:Pokemon蛋白在肝癌及肝癌旁组织中均有高表达,高于正常肝脏组织,两者比较有显著性差异(P＜0.05)。肝癌及肝癌旁组织之间差异无统计学意义(P＞0.05),Pokemon蛋白在肝癌组织中表达水平与病理分级呈显著性相关(P＜0.05),肝癌分化程度越低,Pokemon蛋白表达则越强。P14ARF蛋白在正常肝组织、肝癌旁组织中表达显著高于肝癌组织中表达水平,两者有显著性差异(P＜0.05);正常组及癌旁组无显著性差异(P＞0.05)。Pokemon与P14ARF蛋白表达水平与性别、年龄、HbsAg、转移倾向、肝硬变等因素无相关性。结论1.Pokemon基因mRNA与蛋白在肝癌组织及癌旁组织中高表达,其表达水平与病理分级呈显著性相关,Pokemon在低分化癌患者中是危险因素,与肝癌恶性潜能及分化相关。同时,癌旁组织中可能存在肝癌的癌前病变。Pokemon在肝癌发生发展过程中可能具有重要作用。2 P14ARF基因mRNA与蛋白在正常肝组织、癌旁组织中表达显著高于肝癌组织中表达水平,与Pokemon的表达状态相反,二者呈负相关,提示P14ARF在正常组织具有抑癌基因的作用,其失表达可能引起肝癌的发生。3 Pokemon的过表达和P14ARF的低表达可能在肝癌的发生和发展中起重要作用。