论文部分内容阅读
目的:通过观察中药复方制剂—糖克煎剂对链脲佐菌素（STZ）所致大鼠糖尿病肾病（DN）的尿蛋白排泄（UAE）变化、肾组织转化生长因子（TGF-β）表达的影响等以及临床试验的结果,以探讨糖克煎剂防治早期糖尿病肾病的效果及其作用机制。材料与方法:1.实验研究1.1造模方法采用高糖高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的造模方法复制出糖尿病模型,该方法采用高糖高脂喂养Wistar大鼠一个月,诱发动物肥胖,引起胰岛素抵抗,再以STZ（40mg/kg）腹腔注射造成胰岛素抵抗,从而引发高血糖,并出现微量白蛋白尿。1.2分组和给药方法本实验先按体重随机分为正常对照组10例和实验组70例,将实验组造模后一周内血糖值稳定在16.7mmol/L的61只大鼠再按血糖值随机分为模型组12只、中药预防组12只、低剂量组12只、高剂量组13只和西药对照组12只。中药预防组在注射STZ成DM模后立即开始灌服糖克煎剂,每日上午8～9时1次;其余各组均在成DM模4周后灌胃给药。模型组和正常对照组予等量生理盐水,西药对照组予洛汀新1mg/kg·d灌胃给药,中药预防组共给药12周,中药低、高剂量组及西药对照组给药8周。实验期间自由饮水。中药预防组和低剂量组剂量按成人用量的6.3倍给药,高剂量组按低剂量组3倍灌胃给药。1.3观察指标与测定方法主要观察糖克煎剂的药效学指标,包括观察糖克煎剂对DN大鼠一般情况的影响,糖克煎剂对DN大鼠体重、肾重、相对肾重的影响,采用日本爱科来公司GT-1810血糖仪测定血糖,每周一次;用酶法测定血脂,实验后检测一次;用离子交换层析法测定糖化血红蛋白（GHb）,实验后检测一次。用1mmulite法检测24h尿蛋白定量及尿微量白蛋白排泄率（UAER）,实验后一次。用HE染色和Masson染色肾组织切片,进行普通光镜观察、用醋酸铀-柠檬酸铅双重染色进行电镜观察各组实验性DN大鼠肾组织病理形态学变化;采用免疫组化法测定转化生长因子（TGF-β1）及其内部传导分子smad4的蛋白表达情况,同时检测了肾组织谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）以及超氧化物歧化酶（SOD）两种抗氧化酶的活性等。通过以上效应指标的检测,进一步分析探讨了糖克煎剂对DN大鼠的疗效及其作用机制。2.临床研究选择气虚血瘀型早期DN患者90例,采用随机对照的方法,治疗组（45例）用糖克煎剂（黄芪30g、黄精30g、山药20g、茯苓20g、泽兰30g、坤草20g、牛蒡子30g）,阳性药对照组（45例）用洛汀新（北京诺华制药有限公司提供,10mg/d）,疗程8周,从尿蛋白排泄率（UAER）、血糖（FPG）、糖化血红蛋白（GHb）、血脂、血流变、以及症状积分等多项指标,对气虚血瘀型早期糖尿病肾病进行了较为全面的临床观察。3.统计学方法:采用SPSS16.0统计软件进行分析,组间差异采用方差分析、t检验。计量资料以（?）±s表示,以P＜0.05表示有统计学意义。结果:1.动物实验结果1.1对大鼠一般情况的影响:正常对照组大鼠体重明显增加,精神状态良好,反应灵敏,动作敏捷,毛色光泽。实验组大鼠均表现为多饮、多食、多尿,精神萎靡,反应迟钝,动作缓慢,毛发欠泽。体重、饮水量、尿量等变化图表显示,中药预防组、低剂量组和高剂量组大鼠体重从第五周开始上升,12周时明显回升,饮水量第8周即接近正常,尿量12周末与正常组无差异（P＞0.05）,预防组效果明显,与模型组比较P＜0.01。提示糖克煎剂有改善DN大鼠“三多一少”症状和预防DN病情发生发展的作用。1.2对大鼠24h尿蛋白排泄率的影响:观察组24h尿蛋白排泄率指标,比模型组都有降低,且中药糖克煎剂预防组和高剂量组效果显著（与模型组比较P＜0.01）。1.3对大鼠血糖的影响:各实验组血糖明显高于正常对照组,中药组与模型组比较有显著性差异。中药组糖化血红蛋白,比模型组都有降低,预防组效果显著,P＜0.01。1.4对大鼠血脂的影响:防治组总胆固醇、甘油三脂含量均低于模型组,其降低胆固醇作用,与模型组比较有显著性差异,P＜0.01。1.5.对大鼠肾重、相对肾重的影响:与正常对照组比较,模型组大鼠肾重及KW/BW均有所增加。糖克煎剂和洛汀新治疗8周后,对上述指标均有降低作用,且中药组作用明显。1.6对大鼠肾脏病理变化的影响1.6.1肉眼及光镜下观察:模型组多数大鼠肾脏体积增大,其中1例肾脏表面可见3个2×3mm大小的结节。光镜下肾小球肿胀、充血,体积明显增大,肾小囊变窄,部分肾小球GBM增厚,肾小球系膜增宽,系膜细胞增生,近曲小管上皮肿胀,有的小管腔内可见透明管型,远曲小管上皮胞浆空宽,显示气球样变性。部分肾小管出现管腔变窄,肾间质部分出现水肿,少数可见纤维化。中药预防组、低剂量组、高剂量组和西药组,肾脏体积大部分较模型组变小,但仍较正常大鼠肾脏有所增大;光镜下见肾小球轻度增大、充血,GBM轻度增厚,系膜轻度增宽,肾小管细胞肿胀等病变,病变范围与模型组比较小且轻,未见肾小球硬化及肾间质纤维化。治疗组间未见明显差异。1.6.2电镜下观察:模型组大鼠肾脏GBM呈匀质性增厚,足细胞胞突多呈连续性附着于基膜上,形成足突融合,足细胞内细胞器减少,系膜区扩大,系膜基质增多,胞质内线粒体肿胀,基质密度下降,有的嵴减少,溶酶体数量增多,并且体积较大;肾小管基底膜节段性变薄或增厚;有的肾小管上皮细胞脱落、微绒毛减少、变短、甚至脱落,毛细血管内可见红细胞聚集,出现空泡变性。各治疗组电镜下可见肾小球GBM和肾小管基底膜增厚较模型组大鼠轻,上皮细胞足突距离增宽,肾小管上皮细胞及微绒毛轻微脱落。治疗组间无显著差异性。1.7对大鼠肾脏组织TGF-β1及smad4的影响正常组大鼠肾脏在肾小球和肾小管上皮细胞中均有TGF—β1蛋白表达,但量较少,着色较浅。与正常组大鼠相比,模型组在上述部位的TGF—β1蛋白表达量明显增加,呈极强阳性表达,着色极深,说明TGF—β1蛋白表达增强。各治疗组TGF—β1在上述部位也有弱阳性表达,但与模型组相比有所下降（P＜0.05）,说明经糖克煎剂和洛汀新治疗后可以减少DN大鼠TGF—β1蛋白的表达。smad4检测结果与TGF-β1类似。1.8.对大鼠肾脏组织GSH-Px、SOD的影响肾组织GSH-Px和SOD活力,模型组明显低于正常对照组,预防组、低剂量组、高剂量组及西药组均高于模型组,预防组与西药组比较有统计学意义,P＜0.05。说明中药糖克煎剂能够提高DN大鼠的肾组织GSH-Px和SOD活力,且作用优于洛汀新。2.临床观察结果主要检测指标24h尿微量白蛋白排泄率（UAER）,治疗组由治疗前的74.36±47.90μg/min降至13.25±1.26μg/min,前后对比有显著性差异,P＜0.01,与对照组比较P＜0.05;空腹血糖、糖化血红蛋白（GHb）、血脂、血流变指标,治疗组均较治疗前有明显变化;证候积分由治疗前的19.58±2.55降至治疗后的4.42±1.65,前后比较有显著性差异,P＜0.01;证明糖克煎剂在改善气虚血瘀型早期DN的症状和减少客观指标方面均有明显效果。临床疗效统计结果表明,糖克煎剂治疗早期DN的愈显率为44.44%,总有效率为95.56%,均优于西药洛汀新对照组,P＜0.01。结论:1.糖克煎剂对气虚血瘀型早期DN患者有明显的治疗效果。2.糖克煎剂可改善DN大鼠的一般状况,减轻“三多一少”的症状。3.糖克煎剂能明显降低早期DN的24h尿微量白蛋白排泄率,故而能减轻尿蛋白对肾脏的损害,对肾脏起到了很好的保护作用。4.糖克煎剂能降低血糖,调节血脂代谢紊乱,改善血流变,进而改善肾脏微循环,提升机体的抗氧化能力及保护血管内皮功能。5.糖克煎剂能够控制肾脏肥大,保护肾小球和肾小管结构,改善肾功能。6.糖克煎剂抑制DN大鼠肾脏TGF-β1/smad4蛋白表达,从而抑制肾小球系膜细胞ECM的合成,减少ECM的异常积聚,进而改善肾小球硬化程度。7.糖克煎剂增加DN大鼠肾组织GSH-Px以及SOD活力,防止自由基对肾脏组织细胞的损伤,保护肾脏功能。8.糖克煎剂早期足量用药可以改善早期DN症状,延缓病情发展,值得推广应用。